細胞外調節(jié)蛋白激酶在雌激素促乳腺癌細胞MCF-7增殖中的作用和機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：應用細胞外調節(jié)蛋白激酶磷酸化特異性抑制劑PD98059研究ERK在雌激素促人乳腺癌細胞MCF-7增殖、細胞周期轉化、抑制細胞凋亡中的作用，探討分子機制。 方法：以雌激素受體（estrogen receptor，ER）陽性的人乳腺癌細胞MCF-7為研究對象，應用MTT法檢測17β-E2對MCF細胞增殖影響，確定后續(xù)實驗處理用濃度；MTT法檢測PD98059對17β-E2促MCF-7細胞增殖作用的影響，求取其中效抑制濃度；流式

2、細胞術檢測細胞周期、細胞凋亡情況；TRAP-PCR銀染法檢測端粒酶活性，Western blot檢測p-ERK1/2、野生型P53、PCAF蛋白水平；RT-PCR檢測野生型p53mRNA、PCAFmRNA水平。 結果：ERK磷酸化抑制劑PD98059能抑制17β-E2對MCF-7細胞的促增殖作用，具有時效.量效關系，其差異具有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01），各作用時間點PD98059中效抑制濃度分別為：89.28μmol/L·2

3、4h、39.81μmol/L·48h、21.87μmol/L·72h。應用20μmol/L的PD9805948 h后，能抑制17β-E2促進MCF-7細胞周期轉化作用，使G1期細胞增加，S期和G2期細胞減少（P<0.05）；抑制17β-E2對MCF-7細胞凋亡的抑制作用，使細胞早期凋亡率增加（P<0.05）；阻抑17β-E2增強MCF-7細胞端粒酶活性的作用（P<0.05）；增強野生型P53蛋白表達和p53基因轉錄水平（P<0.05）；

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