可溶性環(huán)氧化物水解酶抑制劑對脂肪細胞脂質(zhì)代謝及分泌功能的影響.pdf

1、目的：用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激脂肪細胞，在體外模擬脂肪細胞的炎癥狀態(tài)，觀察可溶性環(huán)氧化合物水解酶抑制劑(soluble epoxide hydrolase inhibitor,sEHi)-AEPU對脂肪細胞攝取及降解氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)的影響及可能的機制；并觀察AEPU對脂肪細胞膽固醇流出的影響；同時觀察炎癥狀態(tài)下脂肪細胞

2、分泌脂聯(lián)素(adiponectin,ADP)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的情況；探討AEPU對脂肪細胞分泌ADP、TNF-α的影響及其可能的機制，進一步闡明脂肪細胞脂質(zhì)代謝及分泌功能與動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的關(guān)系。通過本研究可能加深對AEPU抗AS的了解，為臨床治療與肥胖相關(guān)的代謝性疾病提供新的治療思路。
　　 方法：培養(yǎng)3T3-L1脂肪細

3、胞至促分化成熟，加入100ng/ml的LPS處理24小時后，再分別用不同濃度AEPU(0,1,10,50,100μmol/L)共同孵育24小時，或在加入不同濃度AEPU前1小時加入過氧化物酶增殖體激活型受體γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPARγ)拮抗劑GW96625μmol/L。用放射配基法測定各組脂肪細胞對125I-ox-LDL的攝取和降解；液體閃爍計數(shù)器檢測各

4、組脂肪細胞氚標記膽固醇(3H-Cholesterol)的流出率；免疫印跡法(Western Blot)測定脂肪細胞CD36、PPARγ和三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)的蛋白表達；實時熒光定量多聚酶鏈式反應(yīng)(Realtime-PCR)測定脂肪細胞CD36、PPARγ及ABCA1mRNA的表達；用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測各組脂肪細胞培養(yǎng)液中的ADP、T

5、NF-α水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.脂肪細胞可以攝取和降解125I-ox-LDL，AEPU干預(yù)后脂肪細胞PPARγ和CD36的蛋白及mRNA表達增加，對125I-ox-LDL的攝取與降解增加，并呈劑量依賴性。
　　 2.AEPU呈劑量依賴性促進脂肪細胞膽固醇的流出；并且AEPU呈劑量依賴性地增加脂肪細胞ABCA1蛋白及mRNA的表達。
　　 3.AEPU呈劑量依賴性地降低炎性脂肪細胞分泌TNF-α的水

6、平，并增加抗炎因子ADP的濃度。
　　 結(jié)論：
　　 1.AEPU能夠增強脂肪細胞對ox-LDL的攝取和降解，可能與上調(diào)PPARγ-CD36的表達有關(guān)。
　　 2.AEPU通過PPARγ-ABCA1途徑能改善炎性脂肪細胞的膽固醇流出，抑制脂肪細胞內(nèi)膽固醇過度蓄積。
　　 3.LPS可以誘發(fā)脂肪細胞的炎癥反應(yīng)，刺激脂肪細胞分泌TNF-α，AEPU能降低脂肪細胞分泌TNF-α，并增加抗炎因子ADP的濃度。AE