轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1基因多態(tài)性與煤工塵肺關(guān)系研究.pdf

1、塵肺病是目前我國(guó)職業(yè)病中發(fā)病率最高、死亡危險(xiǎn)性較大、對(duì)勞動(dòng)者危害最嚴(yán)重的一類疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)目前我國(guó)塵肺病例約占職業(yè)病患者總?cè)藬?shù)的近三分之二。塵肺發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，迄今為止尚難以圓滿解釋其發(fā)生過程，對(duì)其發(fā)生發(fā)展起關(guān)鍵作用的分子機(jī)制尚不清楚，也缺乏對(duì)其根治或阻止進(jìn)展的方法。因此，控制塵肺病的關(guān)鍵是預(yù)防。及時(shí)檢出易感者即高危人群，限制其從事粉塵作業(yè)是重要的預(yù)防措施之一。塵肺病個(gè)體易感因素，特別是遺傳因素研究在國(guó)際范圍內(nèi)已經(jīng)受到重視。 目

2、前國(guó)內(nèi)外研究者認(rèn)為多種細(xì)胞因子在肺纖維化形成過程中發(fā)揮著重要作用，其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的作用尤其受到重視。TGF-β1可能通過上調(diào)膠原和纖維粘連蛋白基因表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的增多，并可能通過降低蛋白酶分泌和增加蛋白酶抑制劑的分泌抑制基質(zhì)的降解，從而參與肺組織的纖維化過程。研究資料提示TGF-β1基因啟動(dòng)子區(qū)-509位點(diǎn)存在多態(tài)性(C＞T)，而且有報(bào)道稱TGF-β1基因多態(tài)性與TGF-β1蛋白的分泌量及罹患某些疾病的危險(xiǎn)度相

3、關(guān)。此研究以中國(guó)河南省漢族煤工塵肺患者110例和煤塵接觸者110例為調(diào)查對(duì)象，分別采集外周靜脈血、提取全血DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)對(duì)調(diào)查對(duì)象的TGF-β1基因-509位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，并用ELISA試劑盒檢測(cè)調(diào)查對(duì)象的血清TGF-β1濃度。目的是初步探討TGF-β1基因-509位點(diǎn)的多態(tài)性在煤工塵肺發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用，以及TGF-β1基因-509位點(diǎn)的多態(tài)性與血清TGF-β1濃度之間

4、的關(guān)系。通過研究，期望對(duì)于闡明基因多態(tài)性與煤工塵肺等塵肺病的遺傳易感性關(guān)系提供相關(guān)線索和參考依據(jù)，為進(jìn)一步加強(qiáng)和改進(jìn)粉塵危害早期預(yù)防和控制措施提供新的思路和手段。 調(diào)查對(duì)象與方法一、調(diào)查對(duì)象煤工塵肺組：均由河南省焦作市職業(yè)病防治所按現(xiàn)行的《塵肺X線診斷標(biāo)準(zhǔn)》(GBZ70-2002)確診的河南省焦作市漢族男性煤工塵肺復(fù)診患者110例，無免疫系統(tǒng)疾病和其它肺部疾病，自愿合作。接塵工種均系掘進(jìn)工和采煤工，粉塵類型為混合型。 煤

5、塵接觸組：在相同礦區(qū)選擇男性漢族有確切煤塵接觸史的掘進(jìn)工和采煤工110例，結(jié)合粉塵作業(yè)健康檢查拍攝高仟狀X射線后前位胸片排除煤工塵肺，并排除免疫系統(tǒng)疾病和其它肺部疾病。 二、調(diào)查方法(一)問卷調(diào)查每位調(diào)查對(duì)象均接受問卷調(diào)查，內(nèi)容包括：個(gè)人一般情況、粉塵作業(yè)史、塵肺病診斷史、既往病史和家族史等。 (二)血樣采集和DNA提取全部研究對(duì)象取清晨空腹靜脈血6ml，3ml離心分離血清，4℃保存?zhèn)溆茫?ml用于提取全血細(xì)胞DNA，-

6、20℃保存?zhèn)溆谩?(三)TGF-β1基因多態(tài)性檢測(cè)通過DNA聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對(duì)包含TGF-β1基因編碼區(qū)啟動(dòng)子-509多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增，限制片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析技術(shù)鑒定其基因型。 (四)血清TGF-β1濃度的檢測(cè)采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清TGF-β1濃度，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。 (五)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用Excel2000對(duì)全部調(diào)查和測(cè)定結(jié)果建立數(shù)據(jù)庫(kù)，SPSS12.0

7、軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果一、調(diào)查對(duì)象一般情況煤工塵肺組110例，年齡33～79(58.96±11.52)歲，接塵工齡3～45(24.68±9.32)年；煤塵接觸組110例，年齡29～68(42.11±6.29)歲，接塵工齡1～34(16.96±6.23)年。兩組之間在年齡和接塵工齡分布不均衡(P＜0.05)。煤塵接觸組人群的基因型及基因頻率經(jīng)Hardy-Weinberg定律檢驗(yàn)證實(shí)達(dá)到遺傳平衡(χ2

8、值為3.85，P＞0.05)。 二、煤工塵肺組和煤塵接觸組TGF-β1基因-509位點(diǎn)基因型分布比較 TGF-β1基因-509位點(diǎn)C/C基因型、C/T基因型、T/T基因型在煤工塵肺組和煤塵接觸組中的分布不平衡，兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。采用分層分析法控制接塵工齡，計(jì)算各基因型患煤工塵肺的調(diào)整危險(xiǎn)度：當(dāng)接塵工齡小于20年時(shí)，C/C+基因型與C/C-基因型比較，OR值為0.27(0.11～0.67)；T/T+

9、基因型與T/T-基因型比較，OR值為5.69(2.09～15.51)。當(dāng)接塵工齡大于20年時(shí)，C/C+基因型與C/C-基因型比較，OR值為0.35(0.14～0.86)；T/T+基因型與T/T-基因型比較，OR值為1.25(0.52～2.98)。三、血清TGF-β1濃度檢測(cè)結(jié)果煤工塵肺組血清TGF-β1平均濃度為65.11±29.35pg/L，煤塵接觸組血清TGF-β1平均濃度為57.30±16.60pg/L，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

10、P＜0.05)。 煤工塵肺組中及煤塵接觸組中不同TGF-β1基因-509位點(diǎn)基因型的血清TGF-β1濃度檢測(cè)結(jié)果均顯示：TGF-β1基因-509位點(diǎn)C/C基因型與C/T基因型的血清TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；T/T基因型比C/C基因型、C/T基因型兩組血清TGF-β1的平均濃度高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同年齡、不同接塵工齡、不同塵肺分期、吸煙者與不吸煙者的TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 應(yīng)用Excel2000對(duì)全部調(diào)查和測(cè)定結(jié)果建立數(shù)據(jù)庫(kù)，SPSS12.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果一、調(diào)查對(duì)象一般情況煤工塵肺組110例，年齡33～79(58.96±11.52)歲，接塵工齡3～45(24.68±9.32)年；煤塵接觸組110例，年齡29～68(42.11±6.29)歲，接塵工齡1～34(16.96±6.23)年。兩組之間在年齡和接塵工齡分布不均衡(P

12、＜0.05)。煤塵接觸組人群的基因型及基因頻率經(jīng)Hardy-Weinberg定律檢驗(yàn)證實(shí)達(dá)到遺傳平衡(χ2值為3.85，P＞0.05)。 二、煤工塵肺組和煤塵接觸組TGF-β1基因-509位點(diǎn)基因型分布比較 TGF-β1基因-509位點(diǎn)C/C基因型、C/T基因型、T/T基因型在煤工塵肺組和煤塵接觸組中的分布不平衡，兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。采用分層分析法控制接塵工齡，計(jì)算各基因型患煤工塵肺的調(diào)整危險(xiǎn)度：當(dāng)

13、接塵工齡小于20年時(shí)，C/C+基因型與C/C基因型比較，OR值為0.27(0.11～0.67)；T/T+基因型與T/T-基因型比較，OR值為5.69(2.09～15.51)。當(dāng)接塵工齡大于20年時(shí)，C/C+基因型與C/C-基因型比較，OR值為0.35(0.14～0.86)；T/T+基因型與T/T-基因型比較，OR值為1.25(0.52～2.98)。 三、血清TGF-β1濃度檢測(cè)結(jié)果煤工塵肺組血清TGF-β1平均濃度為65.11±

14、29.35pg/L，煤塵接觸組血清TGF-β1平均濃度為57.30±16.60pg/L，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 煤工塵肺組中及煤塵接觸組中不同TGF-β1基因-509位點(diǎn)基因型的血清TGF-β1濃度檢測(cè)結(jié)果均顯示：TGF-β1基因-509位點(diǎn)C/C基因型與C/T基因型的血清TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；T/T基因型比C/C基因型、C/T基因型兩組血清TGF-β1的平均濃度高，差異均有

15、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同年齡、不同接塵工齡、不同塵肺分期、吸煙者與不吸煙者的TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 煤工塵肺組和煤塵接觸組之間相同TGF-β1基因-509位點(diǎn)基因型的血清TGF-β1濃度比較結(jié)果，C/C基因型、C/T基因型的血清TGF-β1的平均濃度兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但T/T基因型的煤工塵肺患者血清TGF-β1的平均濃度(88.81±23.33pg/L)高于煤塵接觸者

16、(68.94±11.83pg/L)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論1.TGF-β1基因-509位點(diǎn)存在單核苷酸多態(tài)性，C/C基因型可能是一個(gè)煤工塵肺的非易感性基因型，而T/T基因型可能是一個(gè)易感性基因型。當(dāng)接塵工齡小于20年時(shí)，T/T基因型攜帶者發(fā)生煤工塵肺的危險(xiǎn)度可能較大；當(dāng)接塵工齡大于20年時(shí)，隨接塵工齡延長(zhǎng)，工人吸入粉塵的總量增多，粉塵自身的致病作用可能越來越強(qiáng)，TGF-β1基因-509位點(diǎn)基因型對(duì)煤工塵肺發(fā)生發(fā)