特異性艾滋病核酸疫苗轉導載體的構建及初步應用.pdf

1、當下，在全世界對控制和預防艾滋病病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）感染工作中尚無完全有效手段的前提下，要有效的預防并控制艾滋病病毒的感染，最佳的思路是開發(fā)出一種能夠安全、有效的預防艾滋病病毒感染的疫苗。
　　本研究的目的是構建一種新型的具有特異性的基因轉導載體TG蛋白。基于穿膜肽信號肽（TAT）、DNA識別及結合序列系統(tǒng)（GAL4/UAS）上，添加適當?shù)募兓拌b定標簽His-tag，定向克隆得

2、到編碼TG蛋白的基因片段。以原核表達系統(tǒng)中的pET-28a為載體構建了并得到了原核表達重組質粒pET-TG。GAL4蛋白具有能夠與UAS核苷酸序列特異性結合的能力，所以經(jīng)過純化的TG蛋白在一定條件下可在機體外與嵌入熒光蛋白基因EGFP片段的pVAX1-UAS-EGFP質粒特異性結合，然后再利用瓊脂糖凝膠電泳實驗就可以直觀的證明TG蛋白可與
　　pVAX1-UAS-EGFP質粒特異性結合。再摸索出TG蛋白與pVAX1-UAS-EGF

3、P質粒結合活性最高時的質粒蛋白濃度和時間條件。在細胞水平上將蛋白與質粒特異性的結合物產物與293T細胞共浴，最后在熒光顯微鏡下通過對熒光的檢測研究TG蛋白的細胞轉導活性。
　　通過大腸桿菌表達系統(tǒng)表達分子量為21kDa的目的蛋白。通過瓊脂糖凝膠電泳可以看出質粒與蛋白結合活性最強時質粒量為10g，蛋白量為16g，同時TG蛋白在10min內即可與pVAX1-UAS-EGFP結合，2h內其結合效率無明顯變化。通過細胞轉導發(fā)現(xiàn)pVAX1-