人臍血基質細胞對小鼠單倍體相合外周血干細胞移植GVHD調節(jié)作用.pdf

1、研究背景:
　　異基因造血干細胞移植(Allo-HSCT)是惡性及非惡性造血功能紊亂、某些免疫缺陷性疾病、自身免疫性、遺傳代謝性疾病等的有效治療手段。過去的20年里, Allo-HSCT的臨床應用發(fā)生了巨大變化,由原先的比較單一的人白細胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)相合的同胞間的清髓移植轉向一個更為復雜的領域,尤其在 HLA半相合移植方面取得了重要進展,這一全新的移植方式有效解決了既往供者來源緊缺

2、、配型困難問題,使得90％以上的患者可以在父母、子女、兄弟姐妹等親緣關系中找到合適供者。
　　近來,針對HLA半相合造血干細胞移植方式提出了很多新的策略。經處理或者不經處理的骨髓(bone marrow,BM)聯合或者不聯合外周血干細胞(peripheral blood stem cell,PBSCs),成為臨床上最常見的干細胞來源。然而,骨髓采集物中含有大量紅細胞,當供受者血型不合時,進行移植之前需要去除骨髓中的紅細胞或者血漿。

3、此外,骨髓采集為有創(chuàng)操作,采集過程中需要實施麻醉,增加了供者的痛苦和風險。PBSCs采集方便,有效避免了上述骨髓移植帶來的問題。外周血來源的移植物不僅具有豐富的CD34+細胞可大大提高植入率,且采集物比較干凈,受紅細胞影響小。然而,外周血中含有豐富的成熟T細胞,約為骨髓的5-10倍,大大增加了移植后GVHD的發(fā)生。
　　我們實驗室前期工作中發(fā)現一種來源于人臍血的基質細胞,稱為人臍血源基質細胞(hUCBDSCs),hUCBDSCs可

4、以在多種因子特定組合下實現體外的增殖擴增。同時,hUCBDSCs表面高表達 HLA-I分子,HLA-II類分子及其他共刺激分子表達較少,具有較低的免疫原性。體外實驗發(fā)現其具有抑制異種T細胞增殖的功能,動物實驗證實hUCBDSCs具有減低小鼠MHC半相合骨髓造血干細胞移植后GVHD的能力。本研究旨在探討hUCBDSCs對于小鼠MHC半相合PBSCT后GVHD的調節(jié)作用。
　　一.研究內容及方法:
　　1.參照科室常規(guī)方法,使用

5、6%明膠聯合1.077g/LPercoll分離hUCBDSCs,特定的細胞因子組合下進行細胞體外培養(yǎng)擴增;
　　2.雌性 C57BL/6×BALB/c F1受鼠接受7.0Gy60Coγ射線照射后,經尾靜脈輸注雄性供鼠 C57BL/6來源的外周血單個核細胞(MNC)(1×106/只)、脾臟細胞(1×107/只),構建小鼠MHC半相合外周血干細胞移植后GVHD模型;
　　3.將體外培養(yǎng)擴增的hUCBDSCs(1×106/只)經尾

6、靜脈輸注到已構建的MHC半相合外周血造血干細胞移植GVHD模型上,從小鼠生存率、臨床表現、靶器官(肝臟、小腸、皮膚)病理解剖評定各組小鼠GVHD發(fā)生情況;
　　4.流式細胞儀檢測移植后不同時間點(1周、2周、3周、4周)各組小鼠脾臟NK細胞比例,以及移植后3周小鼠脾臟Th1、Th2細胞比例,初步探索hUCBDSCs調節(jié)MHC半相合外周血造血干細胞移植后GVHD的作用機制。
　　二.主要研究結果:
　　1.按照科室既往的

7、方法,成功實現hUCBDSCs的體外培養(yǎng)擴增。
　　2.通過小鼠生存率、臨床表現、靶器官病理表現及嵌合率的檢測證明MHC半相合外周血造血干細胞移植GVHD模型構建成功。
　　3. hUCBDSCs可顯著延長移植后實驗組小鼠生存時間,降低死亡率(P<0.05);hUCBDSCs可顯著降低移植后多個時相點實驗組小鼠臨床表現及靶器官組織病理GVHD評分(P<0.05),提示聯合hUCBDSCs輸注可有效減輕小鼠MHC半相合PBSC