穿心蓮內酯通過抑制NF-κB信號通路對LPS誘導的小鼠ALI-ARDS的保護機制的實驗研究.pdf

1、背景:急性肺損傷(acute lung injury, ALI)和急性呼吸窘迫綜合征(acuterespiratory distress syndrome，ARDS)是呼吸內科和重癥醫(yī)學科中常見的疾病，有研究報道，該疾病的發(fā)病率呈上升趨勢。目前對ALI/ARDS的發(fā)病機制還未完全闡明。目前認為，ALI/ARDS的發(fā)生是由肺內和或肺外多種因素引起的過度的全身炎癥反應(systemic inflammatoryresponse syndro

2、me，SIRS)的一部分。ALI/ARDS的發(fā)病機制涉及了炎癥反應，凋亡以及氧化應激等多種病理生理現(xiàn)象。穿心蓮內酯(andrographolide)是穿心蓮中主要的二萜內酯類化合物和有效成分，具有廣泛的生物活性。最近國內外多篇權威雜志文章均報道了穿心蓮內酯及其衍生物在抗炎癥、抗氧化、抗凋亡和抗腫瘤方面的顯著作用。同時有報道認為穿心蓮內酯主要是通過抑制核轉錄因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)信號通路減輕炎癥反應的。

3、但穿心蓮內酯在急性呼吸窘迫癥的研究尚無報道。
　　 目的:探討穿心蓮內酯通過抑制NF-κB信號通路對于LPS誘導的小鼠ALI/ARDS的保護機制。
　　 方法:
　　 1.40只雄性BALB/c小鼠隨機分為4組（每組10只），即對照組(control組）、低劑量穿心蓮內酯干預組(LPS+Andro-L組)、高劑量穿心蓮內酯干預組(LPS+Andro-H組)和LPS組。
　　 2.使用LPS氣管內滴入法造模

4、，并在72小時后放血處死小鼠。
　　 3.使用Diff-Quik法對小鼠BALF中細胞總數(shù)、中性粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞進行計數(shù)。使用ELISA對肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和TNF-α水平進行測定。對小鼠肺組織MPO活性進行測定。對小鼠肺組織進行濕/干比(wet to dry ratio，W/D)測定。HE染色用于肺組織病理變化觀察和肺組織損傷評分測量。使用透射電子顯微鏡(Transmission Elect

5、ron Microscope，TEM)對肺泡上皮細胞進行觀察。RT-PCR被用于VEGF和VCAM-1 mRNA的測定。使用Westernblot測定VEGF、VCAM-1、NF-κB p65、phospho-NF-κB p65和β-actin蛋白的表達。NF-κB p65 DNA結合能力使用TransAMTM NFκ B p65Chemi Transcription Factor Assay Kit進行檢測。
　　 4.計量資

6、料以算術平均數(shù)±標準差(mean±SD)表示。采用SPSS11.0進行單因素方差分析，兩樣本均數(shù)多重比較采用LSD法進行兩兩比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1.LPS在誘導小鼠ALI72小時后小鼠BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平較空白組均明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內酯干預后各指標較LPS組降低，并呈劑量相關性(P均＜0.05）。
　　 2.LPS在誘導小鼠ALI

7、72小時后小鼠BALF中細胞總數(shù)、中性粒細胞數(shù)和巨噬細胞數(shù)較空白組均明顯增加(P均＜0.05），在穿心蓮內酯干預后各指標較LPS組降低，并呈劑量相關性（P均＜0.05）。但各組間淋巴細胞計數(shù)未見統(tǒng)計學差異(P均＞0.05）。
　　 3.LPS在誘導小鼠ALI72小時后肺組織中MPO活性較空白組均明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內酯干預后各指標較LPS組降低，并呈劑量相關性（P均＜0.05）。
　　 4.LPS在誘導小

8、鼠ALI72小時后肺組織W/D值較空白組均明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內酯干預后各指標較LPS組降低，并呈劑量相關性（P均＜0.05）。
　　 5.LPS在誘導小鼠ALI72小時后肺組織出現(xiàn)明顯病理學改變肺損傷指數(shù)較空白對照組明顯增加（P＜0.05），在穿心蓮內酯干預后肺損傷指數(shù)較LPS組下降，并呈劑量相關性(P均＜0.05）。
　　 6.LPS在誘導小鼠ALI72小時后電鏡顯示肺泡上皮細胞出現(xiàn)明顯損傷，在穿心蓮

9、內酯干預后肺泡上皮細胞損傷減輕。
　　 7.LPS在誘導小鼠ALI72小時后肺組織VEGF和VCAM-1 mRNA表達量較空白對照組明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內酯干預后各mRNA表達較LPS組降低，并呈劑量相關性(P均＜0.05）。
　　 8.LPS在誘導小鼠ALI72小時后肺組織VEGF和VCAM-1蛋白表達量較空白對照組明顯增加(P均＜0.05），在穿心蓮內酯干預后各蛋白表達量較LPS組降低，并呈劑量相關性

10、(P均＜0.05）。;
　　 9.LPS在誘導小鼠ALI72小時后肺組織phospho-NF-κB p65/total NF-κB p65比值較空白對照組明顯增加(P均＜0.05），在穿心蓮內酯干預后各比值較LPS組降低，并呈劑量相關性（P均＜0.05）。
　　 10.LPS在誘導小鼠ALI72小時后肺組織細胞中NF-κB p65 DNA結合能力較空白對照組明顯增加（P＜0.05），在穿心蓮內酯干預后NF-κBp65 D