趨化因子受體CXCR4與人卵巢癌側群細胞侵襲轉移能力關系的初步探討.pdf

1、研究背景與目的:卵巢癌是嚴重威脅婦女生命健康的惡性腫瘤，其死亡率占婦科腫瘤的首位。據(jù)統(tǒng)計，約70％的卵巢癌病人在就診時已有局部或遠處的轉移灶，近十幾年來，雖然手術和化療的治療方案有所改進，但晚期患者的5年生存率仍低于30％。復發(fā)和侵襲轉移是影響患者預后最主要的因素。研究表明，惡性腫瘤組織中存在一小群具有干細胞樣特性的腫瘤干細胞，具有自我更新、增殖分化和侵襲轉移的能力，它們是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉移的根源。如果能闡明這群腫瘤細胞侵襲轉移

2、的分子機制，便可靶向性阻止腫瘤細胞發(fā)生侵襲轉移，從而有效防止腫瘤轉移。許多研究表明，腫瘤轉移和炎癥細胞浸潤有著相似的形成過程。已證實趨化因子（Chemokines）在為炎癥細胞提供遷移信號、并使之活化、進而啟動其定向移動并使之準確定位中扮演著至關重要的角色。近年來研究發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤細胞可以限定性地表達某些趨化因子受體，提示趨化因子及其受體可能通過與炎癥細胞浸潤相似的機制參與了腫瘤的發(fā)展、惡化和侵襲轉移。趨化因子SDF-1及其受體CXCR

3、4相互作用構成的反應軸越來越受到人們的關注。 為探索SDF-1/CXCR4生物學軸（SDF-1/CXCR4 biological axis）與卵巢癌腫瘤干細胞侵襲轉移的關系，以人卵巢癌細胞系OVCAR3中的具有干細胞樣特性的側群細胞為研究對象，檢測了趨化因子受體CXCR4的表達情況并初步探討SDF-1/CXCR4生物學軸對卵巢癌細胞系OVCAR3中側群細胞侵襲轉移行為的影響。靶向針對SDF-1/CXCR4生物學軸，可能有效抑制卵

4、巢癌腫瘤干細胞的侵襲和轉移。 方法: 第一部分：人卵巢癌OVCAR3細胞系中側群細胞的分離及其干細胞樣特性的鑒定 利用流式細胞術從卵巢癌OVCAR3細胞系中分選出Hoechst33342拒染的側群（SP）細胞和非側群（non-SP）細胞兩個亞群。采用軟瓊脂克隆形成實驗，比較這兩亞群細胞的體外增殖能力；通過體外完全培養(yǎng)基長期培養(yǎng)實驗，比較這兩亞群細胞的不對稱分裂能力；利用Transwell小室法，檢測兩個亞群細胞的

5、體外侵襲力。 第二部分：探討趨化因子SDF-1及其受體CXCR4拮抗劑AMD3100對卵巢癌側群細胞侵襲性的影響 利用細胞免疫熒光染色技術，檢測側群細胞和非側群細胞中趨化因子受體CXCR4蛋白表達情況，比較兩者的差異。利用Transwell小室法，檢測SDF-1和CXCR4的拮抗劑AMD3100對卵巢癌側群細胞體外侵襲能力的影響。 結果: 一、人卵巢癌OVCAR3細胞系中側群細胞的分離及其干細胞樣特性的鑒

6、定 1．OVCAR3細胞系中外排Hoechst33342的側群細胞占13．1％，加維拉帕米（verapamil）組側群細胞的比例降為1．8％。 2．側群細胞的體外克隆形成率為（46．20±23．30）％，非側群細胞僅為（6．20±3．06）％，側群細胞的克隆形成率高于非側群細胞。 3．分選獲得的側群細胞亞群經(jīng)體外培養(yǎng)2周后可增殖分化產(chǎn)生側群細胞（28．1％）及非側群細胞（71．9％），而非側群細胞亞群經(jīng)體外培養(yǎng)2

7、周后僅產(chǎn)生比例極低的側群細胞（0．7％）。 4．Transwell侵襲實驗結果顯示，側群細胞穿過Matrigel基底膜的細胞數(shù)為（215．9±30．9）個，非側群細胞僅為（60．9±10．5）個。側群細胞體外侵襲能力明顯強于非側群細胞。 二、探討趨化因子SDF-1及其受體拮抗劑AMD3100對卵巢癌側群細胞侵襲性的影響 5．細胞免疫熒光染色結果顯示：趨化因子受體CXCR4在側群細胞中表達，而非側群細胞則不表達。

8、 6．Transwell侵襲實驗結果顯示，SDF-1組側群細胞穿過Matrigel基底膜的細胞數(shù)為（154．13±18．87）個，對照組為（100．11±13．62）個，SDF-1+AMD3100組僅為（49．87±11．19）。AMD3100組與另兩組比較有統(tǒng)計學意義。 結論： 1．卵巢癌OVCAR3細胞系中存在外排Hoechst33342熒光染料的側群細胞，卵巢癌側群細胞體外增殖和侵襲能力均明顯強于非側群細胞，并

9、具有不對稱分裂能力，可作為研究卵巢癌腫瘤干細胞生物學特性的細胞模型。 2．CXCR4在卵巢癌OVCAR3細胞系側群細胞中表達。 3．趨化因子SDF-1可促進CXCR4表達陽性的卵巢癌側群細胞侵襲活性，CXCR4的抑制劑AMD3100能抑制這種侵襲活性。 4．趨化因子SDF-1及其受體CXCR4的相互作用可能在卵巢癌側群細胞侵襲轉移中發(fā)揮重要作用，干擾SDF-1/CXCR4的相互作用可能成為腫瘤治療的一個有意義的靶