灰飛虱唾液腺中與水稻條紋葉枯病毒(RSV)傳播相關蛋白的研究.pdf

1、灰飛虱Laodelphax striatellus（半翅目飛虱科）是亞洲地區(qū)水稻上的重要害蟲。它不僅刺吸水稻汁液造成危害，更重要的是傳播水稻條紋葉枯病毒(Rice sripe virus，RSV)造成水稻條紋葉枯病的流行。RSV是纖細病毒屬代表成員，由灰飛虱以循回增殖型方式經卵傳播。介體灰飛虱從感染植株吸食獲毒后，RSV從腸壁內腔擴散到血淋巴及其它組織，最后到達唾液腺，在介體昆蟲取食時又被傳至植株。唾液腺是RSV傳播需要克服的最后一道屏

2、障，而RSV克服唾液腺屏障的機制缺乏研究。前期的研究發(fā)現，帶毒灰飛虱唾液腺中α-亞基-ATP合酶(ATP synthase subunit alpha)、微管蛋白-a-2(Tubulin alpha-2)、蘋果酸脫氫酶(NADP-dependent malic enzyme)、線粒體內膜移位酶(Mitochondrial import innermembrane translocase)及泛素-60s核糖體L40前體(Ubiquitin

3、-60S ribosomal protein L40precursor)等5個蛋白的表達水平顯著高于無毒灰飛虱唾液腺。本論文研究了蘋果酸脫氫酶、線粒體內膜移位酶及泛素-60s核糖體L40前體等3個唾液腺差異蛋白的氨基酸全長序列及基因表達，并用RNA干擾研究了α-亞基-ATP合酶、微管蛋白-α-2、線粒體內膜移位酶基因對RSV傳播的影響。主要結果如下:
　　(1)利用克隆與RACE技術，從帶RSV的灰飛虱體內成功擴增出2060 bp

4、的蘋果酸脫氫酶、661 bp線粒體內膜移位酶及1167bp的泛素-60s核糖體L40前體的的核苷酸全長序列。將全長核苷酸序列提交到NCBI的GenBank數據庫中，分別命名為LsNADP、LsMIT及LsUBI。采用實時定量PCR的方法對LsNADP、LsMIT及LsUBI基因表達進行相對定量，結果發(fā)現帶毒灰飛虱唾液腺和全身中這3個基因的表達均顯著上調。與不帶毒灰飛相比，帶毒灰飛虱唾液腺中LsNADP基因、LsMIT基因及LsUBI的相

5、對表達量分別提高了17.4％、123.6％和62.2％。LsNADP、LsMIT和LsUBI基因在帶RSV灰飛虱蟲體中的相對表達量較無毒灰飛虱分別提高了25.0％、43.4％和16.7％。
　　(2)采用RNAi研究了α-亞基-ATP合酶(LsATP)、線粒體內膜移位酶基因(LsMIT)、微管蛋白-α-2(LsTUB)對灰飛虱傳播RSV的影響。取食了含dsRNA的人工飼料后，灰飛虱中LsATP、LsMIT、LsTUB的相對表達分別