轉染人內皮抑素基因治療人大腸癌裸鼠的實驗研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文轉染人內皮抑素基因治療人大腸癌裸鼠的實驗研究姓名：張波申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：吳肇漢2001.5.1中丈摘要結果：pcDNA3一hEN質粒酶切鑒定的電泳結果顯示：pcDNA3hEN質粒確買有一個560bp左右的插入片段，大小和hENcDNA大致相符。測序結果也顯示與hEN基因的堿基序列完全一致，加上的信號肽基因序列與人單細胞化學趨向蛋白I的序列相同。另外，該基因的兩端有HindlII和ClaI的酶切位

2、點，并有起始密碼子(ATG)和終止密碼子(TAA)。體外轉染實驗的結果也顯示：SA脂質體介導的pcDNA3一hEN質粒轉染LoVo細胞24小時后，LoVo細胞中檢測到hENmRNA表達。結論：本實驗通過對構建質粒的結構和mRAN表達水平上進行檢測后發(fā)現(xiàn)，pcDNA3hEN質粒的構建完全正確。同時，本實驗首次通過PCR方法將人單細胞化學趨向蛋白I的信號肽基因序列加到hENcDNA，以使轉錄成mRNA后的翻譯產物具備跨膜轉運功能。第二部分人

3、內皮抑素基因在人大腸癌裸鼠體內的轉染研究研究目的：本研究是在建立人大腸癌裸鼠模型基礎上，再轉染hEN基因，觀察hEN基因在腫瘤組織的轉染和表達效果。本研究擬解決的主要問題：(1)建立合適的人大腸癌裸鼠模型；(2)瘤內轉染hEN基因(3)基因轉染后，檢測hEN基因mRNA在人大腸癌裸鼠組織中的表達。材料和方法：將種植了人大腸癌的荷瘤裸鼠隨機分成4組：SA脂質體／pcDNA3hEN組(SApcDNA3hEN)、SA脂質體／pcDNA3組(S

4、ApcDNA3)、SA脂質體(SA)組和生理鹽水(NS)組。裸鼠皮下均勻注射LoVo細胞懸液100uL，含1106個LoVo細胞制作人大腸癌裸鼠動物模型。待腫瘤長到23ram時進行基因轉染。pcDNA3一hEN的劑量為40“g，SA脂質體與pcDNA3，hEN按2：1的質量比混勻，在室溫下靜置30分鐘配置而成。采用的轉染方式為腫瘤內注射。第16天時處死小鼠，取下腫瘤標本，采用RTPCR檢測hEN—mRNA的表達。結果：裸鼠皮下注射LoV