慢病毒載體介導(dǎo)的OPG基因體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的研究.pdf

1、目的：
　　 用含有骨保護素(OPG)的慢病毒載體(PGC-FU-OPG-RFP)轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)，觀察其對細胞活性的影響及表達情況。
　　 方法：
　　 選取清潔級4周齡SD大鼠，雌雄不限，無菌條件下取脛骨和股骨，進行骨髓間充質(zhì)干細胞的分離和培養(yǎng)。培養(yǎng)到第三代時進行轉(zhuǎn)染，設(shè)立未轉(zhuǎn)染對照組、空慢病毒載體組、含OPG慢病毒載體組。未轉(zhuǎn)染對照組未經(jīng)特殊處理，空慢病毒載體組轉(zhuǎn)染PGC-FU-RFP

2、，含OPG慢病毒載體組轉(zhuǎn)染PGC-FU-OPG-RFP。轉(zhuǎn)染后48h，免疫熒光顯微鏡觀察熒光表達；流式細胞儀檢測慢病毒的轉(zhuǎn)染效率；用MTT法評價慢病毒轉(zhuǎn)染對BMSCs增殖的影響；用Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后基因的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．成功培養(yǎng)出第三代SD大鼠BMSCs，貼壁的BMSCs散在分布于瓶底，呈長梭形、多角形，生長良好。
　　 2．按10、50、100的感染復(fù)數(shù)(MOI)轉(zhuǎn)染第3代骨

3、髓間充質(zhì)干細胞,48小時后免疫熒光顯微鏡觀察可見紅色熒光蛋白表達，未轉(zhuǎn)染組未見表達。流式細胞儀檢測慢病毒的轉(zhuǎn)染效率分別為12.0％、41.8％、70.0％。
　　 3．MTT檢測發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染后細胞增殖狀態(tài)良好，細胞增殖能力無明顯改變,3組比較無顯著差異（P＞0.05）。
　　 4．Western Blot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染PGC-FU-OPG-RFP組72kDa處有條特征帶，其大小等于OPG-RFP融合蛋白(～44kDa+28