檢測(cè)產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌毒素抗體乳膠凝集試驗(yàn)方法的研究.pdf

1、豬傳染性萎縮性鼻炎(Swineinfectiousatrophicrhinitis，AR)，是豬的一種嚴(yán)重的、廣泛流行的、接觸性上呼吸道疾病；其主要危害是致鼻甲骨萎縮變形、飼料轉(zhuǎn)換率降低、生長速度下降、其它病原如豬繁殖與呼吸綜合征病毒的繼發(fā)感染等?，F(xiàn)在一致認(rèn)為：I相支氣管敗血波氏桿菌(Bordetellabronchisepatica，Bb)和產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(toxingenicPasteurellamultocida，T+Pm)

2、是該病原發(fā)性的病原；且產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌毒素(Pasteurellamultocidatoxin,PMT)是其最主要的致病因子，該毒素是由toxA基因編碼的一種皮膚壞死毒素(dermonecrotictoxin,DNT)，其毒力很強(qiáng)。目前隨著集約化程度的不斷提高，該病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害也日趨嚴(yán)重；因此，用于快速準(zhǔn)確地檢出其毒素的診斷方法的建立將為該病的防制提供科學(xué)根據(jù)。 本課題以本室保存的產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌toxA基因羧基端(C端)

3、原核表達(dá)質(zhì)粒pET28bC2115為研究材料，開展了檢測(cè)產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌毒素抗體的乳膠凝集方法的研究。 本研究內(nèi)容如下：1.本研究將產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌的toxA基因原核表達(dá)質(zhì)粒pET28bC2115轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，該基因在大腸桿菌中以包涵體的形式獲得高效表達(dá)；表達(dá)蛋白約78kDa，Western-blot檢測(cè)表明，表達(dá)蛋白具有生物活性。 2.通過碳化二亞胺的化學(xué)偶聯(lián)作用、以最佳致敏條件致敏純化蛋白，制備該毒素乳膠

4、診斷抗原；并進(jìn)行了特異性試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn)，結(jié)果表明該方法具有較好的特異性和重復(fù)性；并對(duì)研制出的乳膠診斷抗原試劑進(jìn)行了保存期試驗(yàn)，該試劑在4℃可保存6個(gè)月以上、室溫可保存3個(gè)月以上，說明其特性比較穩(wěn)定。 3.用該方法與本室建立的檢測(cè)PMT抗體的ELISA方法同步檢測(cè)9個(gè)豬場(chǎng)83份送檢血清，總符合率為94.0％(78/83)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異不顯著(P＞0.05)；從而建立了一種快速準(zhǔn)確檢測(cè)PMT抗體的乳膠凝集方法。 4

5、.用所建立的方法檢測(cè)了1680份來自廣州、福建、上海、湖南、湖北、山東等省市地區(qū)送檢血清，其中陽性檢出份數(shù)為467份，總陽性檢出率為28.3％，一月份的血清樣品檢出的陽性率最高，達(dá)33.7％，且仔豬與種豬群陽性檢出率高于其它群體；此結(jié)果與該病的流行病學(xué)特點(diǎn)相一致。 本研究初步建立了一種檢測(cè)產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌毒素抗體的乳膠凝集試驗(yàn)方法，通過將其與本實(shí)驗(yàn)室建立的ELISA方法的對(duì)比試驗(yàn)說明該方法特異性較高、重復(fù)性好，該乳膠抗原也較穩(wěn)