miR-143在膀胱癌中的表達及其作用機理探討.pdf

1、中山大學碩士學位論文miR143在膀胱癌中的表達及其作用機理探討姓名：董文申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：黃健20080508mjR—143在膀胱癌中的表達及其作用機理探討低表達進行進一步的鑒定，并探討膀胱癌中miR一143的低表達在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中可能存在的作用機理及臨床意義，為膀胱癌在基因水平的診治提供理論基礎與實驗依據。首先，在對miR一143在膀胱癌中的表達的鑒定及臨床意義分析方面，我們對2張miIⅢAs的表達譜芯片進行

2、分析，發(fā)現miR143在正常膀胱上皮組織中高表達而在膀胱移行上皮癌中卻呈現低表達的特點，二者的差異表達高達177倍。為了對這一結果進行進一步的確認，我們運用Nonhemblotting技術檢測了9例膀胱癌組織、6例正常膀胱組織及膀胱癌細胞株EJ、T24中miR143的表達情況結果顯示6例J下常膀胱組織中miR143高表達，而9例膀胱癌組織以及EJ、T24細胞株中miR143不表達或者低表達。在這一結果基礎上，我們?yōu)榱诉M一步探討miR14

3、3在膀胱癌中低表達與臨床病理的關系，我們運用realtimePCR技術對28例不同分期分級的膀胱移行上皮癌組織及2例正常膀胱上皮組織中miR143的表達進行了定量檢測，結果顯示所有癌組織中miR143都低表達，但很遺憾并沒有發(fā)現其與膀胱癌的分期分級存在顯著的相關性。其次，在探討膀胱癌中miR143功能學方面，我們將miR143成熟體、陰性對照RNA轉染膀胱癌EJ細胞株。轉染6h后，熒光顯微鏡下即能觀察到帶綠色熒光的細胞，轉染率90％以上

4、。轉染48h后，收集細胞的總I斟A及蛋白。進一步通過RealtimePCR技術驗證了轉染的成功，并通過ImPCR，wbstemblot技術觀察了miR一143的潛在靶基因RAS癌基因編碼蛋白RAS及ml玳A的變化。結果顯示，轉染miR。143成熟體的膀胱癌EJ細胞中RAS蛋白的表達水平明顯降低，HRAS、K—RASmRNA無明顯變化；而對照組中RAS蛋白、H—RAS及KRASmI礬A均無明顯變化。對文獻報道的miR143另一潛在靶基因E

5、RK一5，我們發(fā)現轉染miR143成熟體前后膀胱癌EJ細胞中ERK5蛋白變化不明顯。綜上所述，我們運用Nonhemb10ning、realtimePCR技術證實了miR143在膀胱癌中較正常膀胱上皮中顯著降低，且miR143可能通過作用于潛在靶基因RAS，抑制其蛋白的翻譯并阻止其傳導通路的活化，從而抑制腫瘤形成。這些研究成果不僅為膀胱癌的發(fā)病機理提供了新的研究途徑，而且為臨床上膀胱癌的診斷以及miRNAs作為膀胱癌基因治療的新策略奠定了