血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路對高血壓病人的腸系膜動脈平滑肌細胞增殖的影響及阿托伐他汀對它的干預作用.pdf

1、目的：觀察血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路對非高血壓和高血壓病人的腸系膜動脈平滑肌細胞增殖的不同影響；同時觀察阿托伐他汀鈣對該通路的影響及其促平滑肌細胞增殖作用的干預作用。 方法： 1．細胞培養(yǎng)與鑒定：用組織貼塊法培養(yǎng)人腸系膜動脈平滑肌細胞，在倒置光學顯微鏡下和免疫細胞化學的方法鑒定細胞。 2．檢測方法：用四甲基偶氮唑鹽（MTT）法比色測定各組平滑肌細胞增殖率；以雙氫乙酰乙酸—二氯熒光黃（DCFH—DA

2、）作為熒光探針對細胞內活性氧進行熒光標記，用流式細胞儀檢測細胞內活性氧；用逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT—PCR）方法檢測細胞內p22phox蛋白mRNA的表達變化。 3．實驗分組：先分為非高血壓和高血壓兩大組，然后根據(jù)加入不同藥物每個大組分為空白對照組、濃度為10—6mol/L血管緊張素Ⅱ孵育組、濃度均為10—6mol/L血管緊張素Ⅱ和阿托伐他汀鈣共孵育組。 4．數(shù)據(jù)處理：用SPSS13．0軟件包；所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標準差

3、表示，配伍隨機分組方差分析、兩獨立樣本均數(shù)T檢驗和直線相關分析進行統(tǒng)計處理，兩兩比較采用LSD法，以P<0．05判定差異的顯著性。 結果： 1．培養(yǎng)的細胞經光學顯微鏡和免疫細胞化學的方法鑒定為平滑肌細胞，純度在90%以上。 2．血管緊張素Ⅱ在濃度為10—6mol/時促進人腸系膜動脈平滑肌細胞增殖。與空白對照組比較，加入血管緊張素Ⅱ藥物組的OD值均明顯高于空白對照組且差異有統(tǒng)計學意義（P<0．01）。 3．

4、血管緊張素Ⅱ在濃度為10—6mol/時促進人腸系膜動脈平滑肌細胞內活性氧的生成。流式細胞儀測定顯示，與空白對照組比較，加入血管緊張素Ⅱ藥物組的熒光強度比值均明顯高于空白對照組且有統(tǒng)計學意義（P<0．01）。 4．血管緊張素Ⅱ在濃度為10—6mol/時促進腸系膜動脈平滑肌細胞內p22phox蛋白mRNA的表達。 5．與非高血壓病人相比，血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路對高血壓病人的腸系膜動脈平滑肌細胞的促增殖作用

5、更強，無論是細胞增殖率還是細胞內p22phox蛋白mRNA的表達均有統(tǒng)計學意義（P<0．01）。 6．阿托伐他汀鈣能夠部分抑制血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路的信號傳導及其促增殖作用。與濃度為10—6mol/L血管緊張素Ⅱ孵育組比較，血管緊張素Ⅱ和阿托伐他汀鈣共孵育組的細胞增殖率、細胞內活性氧、細胞內p22phox蛋白mRNA的表達均降低并有統(tǒng)計學意義（P<0．01）。 結論： 1．血管緊張素Ⅱ的促人腸