骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及向造血系統(tǒng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實(shí)驗研究.pdf

1、目的：采用均勻設(shè)計法篩選及驗證誘導(dǎo)SD大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化為造血系統(tǒng)細(xì)胞的可能性。 方法：細(xì)胞培養(yǎng)在無菌條件下分離大鼠雙側(cè)股骨骨髓腔內(nèi)骨髓，離心后棄上清培養(yǎng)24小時后換液。之后每3天換液。鑒定骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（bone mesenchymal stem cells）用表面抗原CD34，CD44結(jié)合細(xì)胞成纖維樣生長進(jìn)行鑒定。實(shí)驗取用第三代細(xì)胞分成8組：1對照組；2條件培養(yǎng)基組；3條件培養(yǎng)基+SCF+TPO；4條件

2、培養(yǎng)基+SCF；5條件培養(yǎng)基+TPO；6培養(yǎng)基+SCF+TPO；7培養(yǎng)基+SCF；8培養(yǎng)基+TPO；在倒置相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞。 結(jié)果：第四天觀察到第四組誘導(dǎo)條件下貼壁的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞重新成為懸浮樣集落生長細(xì)胞，其余各組未見明顯形態(tài)學(xué)改變。以第四組誘導(dǎo)條件為模板擴(kuò)大生產(chǎn)出懸浮聚集狀生長細(xì)胞，采用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白（FITC-Annexin-v）、碘化丙錠（PI）雙染色免疫熒光法[2]檢測細(xì)胞凋亡率，并與正常貼壁骨髓

3、基質(zhì)干細(xì)胞做統(tǒng)計學(xué)分析比較，比較結(jié)果未見顯著性差異。證明細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變不是因為誘導(dǎo)條件引起的細(xì)胞凋亡。對懸浮狀細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面抗原的免疫組織化學(xué)和免疫熒光的檢測均為CD44陽性，CD34陰性。 結(jié)論：在2-ME及干細(xì)胞因子（SCF）的作用下，骨髓基質(zhì)干細(xì)胞發(fā)生由貼壁成纖維樣生長變?yōu)閼腋〖錁娱L的形態(tài)學(xué)改變；細(xì)胞凋亡測定結(jié)果證實(shí)上述細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變系非細(xì)胞死亡或凋亡，提示為細(xì)胞分化的一種正常的形態(tài)學(xué)變化：對轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面