裂褶菌液體發(fā)酵條件及發(fā)酵產(chǎn)物的藥理活性研究.pdf

1、裂褶菌Schizophyllum Commune Fr.是一種源自俄羅斯民間的珍稀大型真菌，被廣泛用于防治疑難雜癥，特別是癌癥。近年來，對于它的化學成分和藥理作用的研究已經(jīng)日益引起國內(nèi)外研究人員的重視，但是樺褐孔菌大規(guī)模的人工馴化還沒有實現(xiàn)，其來源主要是靠采集，這使樺褐孔菌的開發(fā)利用受到了限制，而液體發(fā)酵培養(yǎng)恰能彌補這一不足。本實驗通過液提深層發(fā)酵獲得菌絲體，研究了菌絲體和發(fā)酵液的藥理作用，主要包括其體外抑菌作用，胞外粗多糖的抗腫瘤活性

2、及其機理和粗多糖的抗腫瘤活性，胞內(nèi)(外)粗多糖的抗炎作用，并對胞內(nèi)多糖的提取工藝進行了研究。 1.本文所得結(jié)果表明，裂褶菌液體發(fā)酵的最適培養(yǎng)基配方為：葡萄糖20g、玉米粉50g、KH2PO43.0 g/L、MgSO41.5 g/L。當培養(yǎng)溫度為28℃，搖瓶裝量30％，轉(zhuǎn)速120r/min，液體菌種接種量12％，搖瓶培養(yǎng)時間11天時所得菌絲干重最大。 2.本文采用紙片擴散法和菌餅法對裂褶菌菌絲體及發(fā)酵液的抑菌活性進行了初步

3、研究。利用4種細菌：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷沙門氏、腸炎沙門氏做指示菌，結(jié)果顯示裂褶菌菌絲體及發(fā)酵液均能抑制4種指示菌的生長，說明裂褶菌的菌絲體及發(fā)酵液中均含有抑菌活性成分，其菌絲體的抑菌活性成分主要在正丁醇提取物中。 3.本文利用正交實驗分別研究了水提取，超聲提取和微波提取裂褶菌菌絲體多糖的最優(yōu)工藝。根據(jù)極差分析確定了熱水浸提法的最優(yōu)工藝為浸提時間4小時、浸提5次、液料比50、浸提溫度90℃多糖提取率為13.45％；微波

4、提取法的最優(yōu)工藝為微波處理20min、液料比60、提取4次，提取率為10.8％；超聲提取法的最優(yōu)工藝為超聲40min、提取4次、液料比60、溫度50℃、頻率70Hz，提取率為19.53％。 用超聲波法和醇沉法分別提取了菌絲體和發(fā)酵液中的粗多糖，其粗多糖得率分別為：每100g干菌絲體得18.85g粗多糖；每1000ml發(fā)酵液得7.76g粗多糖。用苯酚硫酸法測定菌絲體和發(fā)酵液粗多糖中多糖含量為78.42％，64.63％。 4

5、.初步研究了裂褶菌胞外粗多糖對實體瘤小鼠及腹水瘤小鼠腫瘤的抑制作用。以空白對照組生理鹽水，陽性藥組復方環(huán)磷酰胺，給藥組裂褶菌的胞外粗多糖(高劑量組：500mg/kg，中劑量組：250mg/kg，低劑量組125mg/kg)對小鼠肉瘤S180和肝癌H22的抑瘤率進行了初步研究，以胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)為指標對綜合考察裂褶菌胞外粗多糖的高抑瘤活性和低毒性特征，并測得了腫瘤小鼠血清中IL-18和TNF-α的含量，簡單說明了裂褶菌胞外粗多糖抗腫瘤的作

6、用機理。胞外粗多糖對肉瘤S180小鼠的抑瘤率，中劑量組最高可達到49.03％，低劑量組次之為36.41％，對于肝癌H22的抑瘤率，中劑量組最高可達51.54％，低劑量組次之為42.29％，高劑量組也可達到35.62％，說明裂褶菌的胞外粗多糖能有效抑制肉瘤S180小鼠和肝癌H22小鼠的腫瘤生長，且給藥組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯高于空白對照組，說明裂褶菌胞外粗多糖在一定程度上能增強機體的免疫能力。兩種腫瘤小鼠血清中IL-18和TNF-α的

7、含量均有提高，這在另一層面上說明裂褶菌胞外多糖主要是以提高機體免疫力而起到抗腫瘤作用的。對腹水瘤小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生命延長率的研究結(jié)果表明裂褶菌胞外粗多糖能明顯延長腹水瘤小鼠的生存時間，對肉瘤S180小鼠平均能延長1.08d，對肝癌H22小鼠平均能延長2.78d。 5.采用與胞外粗多糖同樣方法對裂褶菌的胞內(nèi)粗多糖進行了抗腫瘤活性研究，結(jié)果表明胞內(nèi)粗多糖的三個劑量組對小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生長均有明顯的抑制作用

8、。胞內(nèi)粗多糖對肉瘤S180小鼠的抑瘤率高劑量組最高達48.28％，中劑量組次之為39.85％，低劑量組也可達35.25％，對肝癌H22小鼠的抑瘤率高劑量組最高達40.71％，中劑量組次之為35.50％，低劑量組也可達33.21％，說明裂褶菌的胞內(nèi)多糖對小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生長有明顯的抑制作用；且給藥組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯高于空白對照組，說明裂褶菌胞內(nèi)粗多糖能增強小鼠機體的免疫能力。 6.以空白對照組生理鹽水，陽性

9、藥組消炎痛(10mg/kg)，給藥組裂褶菌的胞內(nèi)粗(外)多糖(高劑量組：500mg/kg，中劑量組：250mg/kg，低劑量組125mg/kg)對二甲苯至小鼠耳腫脹抑制作用進行了初步研究。結(jié)果表明裂褶菌胞內(nèi)粗(外)多糖對二甲苯至小鼠耳腫脹均有極顯著的抑制作用，且在一定程度上提高了小鼠的免疫能力。其中裂褶菌的胞內(nèi)粗多糖高、中、低劑量組的腫脹抑制率分別為34.43％，22.68％，16.44％；裂褶菌的胞外粗多糖高、中、低劑量組的腫脹抑制率