綿羊肺炎支原體誘導(dǎo)肺臟上皮細(xì)胞自噬的初步研究.pdf

1、綿羊肺炎支原體（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）可以引起綿羊(Ovis aries)傳染性胸膜肺炎(Contagious ovine pleuropneumonia)。該病分布面積廣泛，給養(yǎng)羊業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來多項(xiàng)研究表明，MO能夠黏附到綿羊肺臟細(xì)胞，并對(duì)宿主細(xì)胞造成極大危害。但宿主細(xì)胞與MO感染的關(guān)系仍不明確。
　　細(xì)胞自噬（autophagy）是廣泛存在于真核生物中維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的一種生理

2、現(xiàn)象。自噬發(fā)生時(shí)，可通過自噬溶酶體對(duì)細(xì)胞內(nèi)的衰老細(xì)胞器和長(zhǎng)壽蛋白進(jìn)行吞噬和降解，降解產(chǎn)物被用于重新合成蛋白質(zhì)以維護(hù)細(xì)胞器功能及細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)等。近年來研究表明，自噬在機(jī)體抗感染免疫過程中也發(fā)揮著重要功能。
　　目的:
　　通過建立MO感染的細(xì)胞模型，驗(yàn)證MO是否會(huì)誘導(dǎo)自噬的發(fā)生，以及自噬對(duì)MO的感染有何作用。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)以鼠肺臟上皮細(xì)胞TC-1為研究對(duì)象，通過建立MO感染的細(xì)胞模型，檢測(cè)MO（感染復(fù)數(shù)

3、10∶1）感染0h、6h、12h、24 h細(xì)胞的自噬狀態(tài)，同時(shí)設(shè)立不同時(shí)期的空白對(duì)照;并運(yùn)用RNAi技術(shù)研究自噬與細(xì)胞清除MO的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　(1)透射電子顯微鏡結(jié)果顯示，MO感染TC-1細(xì)胞6h后，出現(xiàn)了雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體，12h、24h均可發(fā)現(xiàn)自噬體和自噬溶酶體。
　　(2)熒光顯微鏡結(jié)果顯示，MO感染TC-1細(xì)胞6h后，LC3A/B蛋白大量聚集，表明自噬體的出現(xiàn)，自噬已開始發(fā)生;12h、24h時(shí)，自噬現(xiàn)

4、象更為明顯。
　　(3)qPCR和Western blot結(jié)果顯示，MO感染TC-1細(xì)胞后，自噬相關(guān)基因LC3A/B、P62、Atg7在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平明顯升高，且差異性顯著。
　　(4)CCU實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TC-1細(xì)胞對(duì)MO具有一定清除作用。
　　(5)RNAi技術(shù)沉默自噬關(guān)鍵基因P62和Atg7，抑制自噬的發(fā)生，TC-1細(xì)胞對(duì)MO的清除能力降低，說明自噬參與了TC-1細(xì)胞對(duì)MO的清除。
　　結(jié)論: