廣西虎紋捕鳥蛛毒素成分分析及對人腦膠質(zhì)瘤U251細胞的作用機理研究.pdf

1、目的：通過對廣西虎紋捕鳥蛛毒成分進行氨基酸測定，以及紅外、紫外光譜法定性分析，初步鑒定蛛毒的化學成分；并對其藥理作用作體外實驗，研究毒素對人膠質(zhì)瘤細胞的凋亡的影響，以及對細胞中Caspase-3和Bcl-2/Bax的表達影響。
　　方法：1化學成分的初步定性分析采用氨基酸自動分析儀對蛛毒的多種氨基酸成分進行定性及定量的研究，并且輔以紫外、紅外光譜法進行定性研究，初步鑒定蛛毒的化學成分。2抗腫瘤活性的研究采用MTT法、流式分析法、C

2、aspase-3活性測定法測定HWZD對U251人腦膠質(zhì)瘤細胞的增殖作用的影響。3 HWZD對 U251人腦膠質(zhì)瘤細胞凋亡相關(guān)基因表達的影響采用RT-PCR技術(shù)測定HWZD對U251人腦膠質(zhì)瘤細胞抑癌基因bax，癌基因bcl-2表達的影響。
　　結(jié)果：1采用氨基酸自動分析儀對蛛毒的多種氨基酸成分進行定性及定量的研究，結(jié)果表明該鑒別方法操作簡便、專屬性強，可用于蛛毒的定性鑒別和含量測定；利用紫外-可見光譜、紅外光譜法對蛛毒樣品進行光

3、譜鑒別研究，顯示蛛毒具有一定的光譜特征。2 MTT法表明HWZD對U251細胞均有顯著抑制作用(P＜0.05或P＜0.01)，具有劑量依賴性。HWZD劑量為37.5、50、75、100、150mg/L時，對U251細胞的增殖有顯著性抑制作用(P＜0.05或P＜0.01)，IC50為53.48 mg/L。流式細胞儀分析法表明HWZD對U251細胞具有顯著性凋亡作用，并有濃度依賴和時效關(guān)系。在劑量為150 mg/L，并誘導48h，細胞早期凋

4、亡率84.1％，晚期凋亡率4.48%。Caspase-3活性測定表明HWZD在150 mg/L時對細胞中的執(zhí)行分子Caspase-3的激活速度快，活化程度為9.23并存在劑量依賴關(guān)系。3 HWZD在濃度為50、75、100 mg/L時均顯著增強基因bax的表達水平(P＜0.05或P＜0.01)。HWZD在濃度為50、75、100mg/L時均顯著降低癌基因bcl-2的表達水平(P＜0.05或P＜0.01)。
　　結(jié)論：1初步建立了H