尼古丁戒斷切口痛大鼠術后痛覺過敏機制的研究.pdf

1、第一部分：改良尼古丁依賴-戒斷大鼠模型的建立
　　 目的:
　　 通過間斷皮下注射尼古丁制作改良尼古丁依賴-戒斷大鼠模型。
　　 方法:
　　 SD大鼠30只，隨機分成5組，每組6只，為正常對照組（Control組）、生理鹽水組(NS組)、尼古丁3mg/kg/d組(NT3組)、尼古丁9mg/kg/d組(NT9組)和尼古丁18mg/kg/d組(NT18組)，分別不注射、生理鹽水、尼古丁1mg/kg、3mg/

2、kg和6mg/kg皮下注射，3次/d，連續(xù)7d。于第7d末次注射后60min皮下注射美加明1mg/kg。觀察大鼠注射尼古丁期間和戒斷后體重變化、存活情況和尼古丁戒斷評分。
　　 結果:
　　 與NT3組比較，注射尼古丁后第7d，NT9組和NT18組大鼠體重增加緩慢（3.8±1.3g，2±0.3gvs7.2±1.0g）(P＜0.05)，戒斷后第1d和第2d大鼠體重增加迅速(P＜0.01)，NT9組和NT18組大鼠美加明激發(fā)

3、后出現(xiàn)更多的戒斷癥狀(P＜0.01)，但NT18組大鼠死亡率達17％。
　　 結論:
　　 間斷皮下注射尼古丁9mg/kg/d連續(xù)7d可以成功制作改良尼古丁依賴-戒斷大鼠模型。
　　 第二部分：尼古丁戒斷切口痛大鼠疼痛行為學觀察
　　 目的:
　　 觀察尼古丁戒斷后和尼古丁戒斷切口痛大鼠術后足底機械刺激縮足閾值(MWT)和熱刺激縮足潛伏期(TWL)的變化。
　　 方法:
　　 SD

4、大鼠30只，隨機分為5組。①正常對照組（Control組，n=6）:大鼠在正常條件下飼養(yǎng)7d，不給予任何處理;②生理鹽水對照組(NS組，n=6):大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，分別于每天5:00，13:00和21:00時經皮下注射生理鹽水，每次0.1ml，3次/d，連續(xù)7d;③尼古丁戒斷組(NT組，n=6):大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，分別于上述3個時間點經皮下注射尼古丁每次3mg，3次/d，連續(xù)7d;④切口痛組(IP組，n=6):大鼠在正常條件下飼

5、養(yǎng)7d后于右后肢足底做切口痛模型;⑤尼古丁戒斷切口痛組(NT+IP組，n=6):大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，分別于每天上述3個時間點經皮下注射尼古丁每次3mg，3次/d，連續(xù)7d，第7d注射尼古丁后于右后肢足底做切口痛模型。對Control組、NS組和NT組大鼠分別于第8d測量右下肢足底MWT和TWL的變化，連續(xù)7d;對IP組和NT+IP組大鼠分別于第8d測量下肢術側和健側足底MWT和TWL的變化，連續(xù)7d。
　　 結果:
　　

6、 1.尼古丁戒斷對大鼠疼痛行為學的影響
　　 (1)尼古丁戒斷對大鼠MWT變化
　　 與Control組相比，NT組大鼠在尼古丁戒斷后1～7d足底MWT明顯降低(P＜0.01)。組內比較，NT組大鼠在戒斷后1d和2dMWT降低更為顯著(P＜0.01)。
　　 (2)尼古丁戒斷對大鼠TWL的影響
　　 與Control組相比，NT組大鼠在尼古丁戒斷后1～7d足底TWL明顯降低(P＜0.01)。組內比較，N

7、T組大鼠在戒斷后第4dTWL降低更為顯著（P＜0.01）。
　　 2.尼古丁戒斷對切口痛大鼠疼痛行為學的影響
　　 (1)尼古丁戒斷對切口痛大鼠MWT的影響
　　 與IP組大鼠術側相比，IP+NT組大鼠術側MWT在術后1～7d明顯降低(P＜0.05);與IP組大鼠術側相比，IP組大鼠健側足底MWT在術后1～4d明顯升高(P＜0.05)，術后第5～7dMWT沒有差異(P＞0.05);與IP組大鼠健側相比，IP+NT

8、組大鼠健側在第1～7dMWT明顯降低(P＜0.05)。
　　 (2)尼古丁戒斷對切口痛大鼠TWL的影響
　　 與IP組大鼠術側相比，IP+NT組大鼠術側足底TWL在術后1～7d明顯降低(P＜0.05);與IP組大鼠術側相比，IP組大鼠健側足底TWL在術后1～6d明顯升高(P＜0.05);與IP組大鼠健側相比，IP+NT組大鼠健側足底TWL在術后1、2、3、5和6d明顯降低(P＜0.05)。
　　 結論:
　

9、　 1.尼古丁戒斷可以引起大鼠疼痛敏感性增高。
　　 2.尼古丁戒斷可以引起切口痛大鼠痛覺敏感性增高，這與臨床上吸煙患者術后阿片類藥物需要量增加相一致，為進一步研究其發(fā)生機制奠定了基礎。
　　 第三部分：脊髓小膠質細胞在尼古丁戒斷切口痛大鼠術后痛覺過敏中的作用
　　 目的:
　　 探討脊髓小膠質細胞在尼古丁戒斷切口痛大鼠術后痛覺過敏中的作用。
　　 方法:
　　 SD大鼠42只隨機分為3

10、組。①單純切口痛組（IP組，n=18）:根據處死取材時間再分為3個亞組，每組6只。大鼠正常條件下飼養(yǎng)，于右下肢足底做切口痛模型，術后第1、2、3、5、7d對大鼠右下肢足底進行MWT和TWL的測定;②尼古丁戒斷切口痛組(NT+IP組，n=18):根據處死取材時間再分為3個亞組，每組6只。大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，于每天5:00，13:00和21:00時皮下注射尼古丁3mg/kg，3次/d，連續(xù)7d。第7d注射尼古丁后于大鼠右下肢足底做切口痛模

11、型，于術后第1、2、3、5、7d對右下肢足底進行MWT和TWL的測定;③米諾環(huán)素組（M組，n=6）:同N+IP組，于大鼠做切口痛模型前1h腹腔內注射米諾環(huán)素100mg/kg。然后分別于術后第1、2、3、5、7d對大鼠右下肢足底進行MWT和TWL的測定。IP組和NT+IP組大鼠術后第1d痛行為學測試后處死取材;第2、3d分別測試痛行為學，于第3d處死取材;第5、7d分別測試痛行為學，于第7d處死取材。取脊髓腰膨大L4-6段，通過免疫組織化

12、學方法測定IBA-1標記的陽性細胞的表達情況和數(shù)量。
　　 結果:
　　 1.腹腔內注射米諾環(huán)素對尼古丁戒斷切口痛大鼠疼痛行為學的影響
　　 (1)與IP組比較，NT+IP組大鼠在術后1、2、3、5、7dMWT均顯著降低（P＜0.01）;與NT+IP組比較，M組大鼠在切口前1h腹腔內注射米諾環(huán)素100mg/kg，在術后第1dMWT明顯升高（28.12±1.36gvs22.34±2.37g）(P＜0.01)，而第2

13、、3、5、7d沒有變化（P＞0.05）。
　　 (2)與IP組比較，NT+IP組大鼠在術后1、2、3、5、7dTWL均顯著降低(P＜0.01);與NT+IP組比較，M組大鼠在切口前1d腹腔內注射米諾環(huán)素100mg/kg，術后第1dTWL明顯升高(7.54±1.26svs5.16±1.16s)(P＜0.01)，而第2、3、5、7d沒有變化（P＞0.05）。
　　 2.IBA-1標記的活化小膠質細胞的變化
　　 通過

14、免疫組織化學由IBA-1標記的活化小膠質細胞表現(xiàn)為細胞內棕褐色的標記物。主要密集分布在脊髓背角第Ⅰ、Ⅱ板層。組內比較，IP組大鼠脊髓背角IBA-1陽性細胞術后第3d比術后第1d和第7d明顯增多(P＜0.01)。與IP組比較，在術后第1dNT+IP組大鼠IBA-1陽性細胞明顯增多(P＜0.01)，在術后第3d和第7dNT+IP組大鼠IBA-1陽性細胞也增多（P＜0.01）。
　　 結論:
　　 尼古丁依賴-戒斷引起大鼠脊髓

15、背角小膠質細胞活化，小膠質細胞活化參與了尼古丁戒斷切口痛大鼠術后痛覺過敏的形成。
　　 第四部分：尼古丁戒斷切口痛大鼠術后切口周圍組織中IL-1β水平的變化
　　 目的:
　　 探討切口周圍組織中IL-1β在尼古丁戒斷切口痛大鼠術后痛覺過敏中的作用。
　　 方法:
　　 SD大鼠96只，隨機分成4組:①正常對照組(Na(i)ve組，n=6)，在正常條件下飼養(yǎng)，不做任何處理;②尼古丁戒斷組(NT組，

16、n=30)，大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，于每天5:00，13:00和21:00時皮下注射尼古丁3mg/kg，3次/d，連續(xù)7d。③切口痛組(IP組，n=30)，大鼠在正常條件下飼養(yǎng)7d后，根據Brennan等方法制作大鼠切口痛模型;④尼古丁戒斷切口痛組(NT+IP組，n=30)，大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，于每天5:00，13:00和21:00時皮下注射尼古丁3mg/kg，3次/d，連續(xù)7d。于第7d末根據Brennan等方法制作大鼠切口痛模型。N

17、T組、IP組和NT+IP組大鼠按術前2h、術后2h、術后24h、術后48h和術后72h再分為5個亞組，每個亞組6只。分別于術后2h、24h、48h和72h進行疼痛行為學測試;于術前2h、術后2h、24h、48h和72h處死大鼠，取材皮膚切口周圍皮膚組織，通過ELISA法檢測大鼠皮膚組織中IL-1β的含量。
　　 結果:
　　 1.尼古丁戒斷切口痛大鼠疼痛行為學變化
　　 (1)尼古丁戒斷切口痛大鼠足底MWT的變化

18、
　　 與Na(i)ve組大鼠相比，IP組大鼠從術后2h開始，其MWT開始下降(P＜0.05)，至術后第48hMWT達最低（P＜0.01），到術后第72h開始好轉。與IP組相比，NT+IP組術后2h、24h、48h、72h其MWT顯著降低（P＜0.05），以術后48hMWT降低最為顯著(P＜0.01)。
　　 (2)尼古丁戒斷切口痛大鼠足底TWL的變化
　　 與Na(i)ve組大鼠比較，IP組大鼠術后2hTWL開

19、始下降(P＜0.05)，至術后48hTWL達最低值(P＜0.01)，到術后第72h開始好轉。與IP組比較，NT+IP組術后2h和24hTWL雖然降低，但沒有統(tǒng)計學意義，術后48h和72hTWL明顯縮短（P＜0.05），以術后48hTWL縮短最為顯著（P＜0.01）。
　　 2.尼古丁戒斷切口痛大鼠切口周圍皮膚組織中IL-1β的變化
　　 與IP組術前2h(11.52±0.35pg/mg)比較，NT組大鼠在各時間點切口周圍

20、組織中IL-1β水平明顯增高(P＜0.01)，IP組大鼠術后各時間點均明顯升高(P＜0.01)，從術后2h(44.28±6.27pg/mg)開始升高，術后48h(111.83±8.24pg/mg)達高峰，術后72h開始回降。
　　 與IP組各時間點比較，NT+IP組大鼠在相應時間點切口周圍組織中IL-1β水平明顯增高(P＜0.01)。
　　 與術前2h(19.69±1.86pg/mg)，NT+IP組大鼠切口周圍組織中IL