FOXO3a異常表達與胃癌生物學(xué)行為和臨床病理特征關(guān)系的實驗研究.pdf

1、第一部分 FOXO3a在胃癌組織中的表達與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性研究
　　目的:檢測FOXO3a在胃癌組織中的表達，并分析FOXO3a的表達程度與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。方法:收集2006～2008年在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院接受胃癌根治術(shù)的患者的胃癌組織標本共150例制成組織芯片，進行免疫組織化學(xué)染色。根據(jù)FOXO3a在胃癌組織中的染色強度和染色面積將上述患者分為FOXO3a高表達組和低表達組，分析兩組患者在年齡、性別、

2、腫瘤部位、分化程度、浸潤深度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、脈管侵犯和神經(jīng)侵犯等方面的差別。結(jié)果:150例患者中男性109例，女性41例，平均年齡61.2歲。95例胃癌組織高表達FOXO3a，占63.3％。FOXO3a高表達與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管侵犯及患者TNM分期呈正相關(guān)，但與患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤分化程度及神經(jīng)侵犯無相關(guān)性。結(jié)論:FOXO3a在胃癌組織中高表達，其表達量與患者腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度、血管侵犯及

3、TNM分期呈正相關(guān)，可能成為胃癌患者的負性預(yù)測因子。
　　第二部分 FOXO3a異常表達對胃癌細胞株增殖、遷移、侵襲和化療藥物敏感性的影響
　　目的:通過慢病毒載體靶向抑制FOXO3a基因，探討FOXO3a異常表達對胃低分化腺癌細胞株AGS增殖、遷移、侵襲和化療藥物敏感性的影響。方法:利用FOXO3a慢病毒干擾載體和空載體感染AGS細胞株，分別構(gòu)建AGS-FOXO3a-shRNA干擾株和AGS-negative-shRNA對

4、照株。MTT法測定細胞增殖，劃痕試驗檢測遷移能力，Transwell試驗檢測侵襲能力。Western blot測定細胞內(nèi)Cathepsin D和Cathepsin L蛋白的表達水平。上述細胞系與不同濃度的伊立替康、奧沙利鉑、紫杉醇共培養(yǎng)48小時，MTT法測定48小時細胞抑制率，計算IC50和RI;流式細胞儀檢測不同化療藥物對細胞凋亡的影響，Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果:轉(zhuǎn)染FOXO3a-shRNA可有效降低AGS

5、-FOXO3a-shRNA細胞株內(nèi)FOXO3a mRNA和蛋白的表達。同對照株相比，AGS-FOXO3a-shRNA的細胞增殖未受到明顯影響，但遷移和侵襲能力明顯下降，同時細胞內(nèi)成熟型Cathepsin D、Cathepsin L的蛋白表達水平均較對照株明顯降低。AGS-FOXO3a-shRNA對伊立替康和奧沙利鉑的敏感性明顯上升，流式細胞儀檢測到在伊立替康和奧沙利鉑作用48小時后，AGS-FOXO3a-shRNA細胞的凋亡百分比顯著高

6、于對照株，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。同時細胞內(nèi)活性Caspase-3的蛋白表達水平較對照組明顯升高，PARP-1的蛋白表達水平較對照組明顯降低，Caspase-9、Bax、Bcl-2的表達水平較對照組無明顯差異。AGS-FOXO3a-shRNA細胞在紫杉醇作用48小時后，細胞內(nèi)Caspase-3、PARP-1、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白表達水平均較對照株無明顯差異。結(jié)論:我們的實驗證實FOXO3a-shRNA通過下調(diào)細胞內(nèi)成熟