復方苦參止癢液的制備工藝及其質量標準研究.pdf

1、復方苦參止癢液處方為我院中醫(yī)科邢彥軍主任的經驗方，臨床療效顯著。本品是由苦參、黃連、蛇床子等十余味中藥制成的外用制劑，對各種病原體所致的外陰炎和陰道炎有較好的治療作用。為了將該藥物更好的應用于臨床并便于儲運與使用，參照中藥研究的指導原則，研究了本品的制備工藝。 目的：通過設計工藝路線，進行工藝方法和條件的篩選，制定出方法簡便，條件確定的穩(wěn)定工藝，以優(yōu)選復方苦參止癢液的最佳提取工藝與制備方法。 方法：采用正交試驗篩選提取工

2、藝。以加水量(A)、浸泡時間(B)、提取時間(C)作為考察因素，以總揮發(fā)油的收集量為指標，優(yōu)選蛇床子、花椒、莪術中的揮發(fā)油提取工藝。以加水量(A)、煎煮時間(B)、煎煮次數(shù)(C)及醇沉濃度(D)作為考察因素，以苦參堿為量化指標，優(yōu)選最佳水提取乙醇沉淀工藝。以ZTC1+1澄清劑的用量(A)、藥液濃度(B)、反應溫度(C)、攪拌速度(D)及時間(E)5個因素作為考察因素，優(yōu)選出最佳水提取澄清劑沉淀工藝。比較最佳水醇法工藝與最佳澄清劑法工藝，

3、以苦參堿和蛇床子素含量為指標，優(yōu)選出最合適的精制工藝。 結果：通過正交試驗篩選的最佳制備工藝條件為：(1)揮發(fā)油的提?。荷叽沧印⒒ń?、莪術加14倍量水，浸泡0.5小時，提取7小時。(2)水醇法工藝的最佳條件為：加12倍水，煎煮2次，每次2小時，醇沉濃度為80％。(3)吸附澄清劑法工藝的最佳條件為：澄清劑用量為8％，藥液濃度為1:6，反應溫度為60-80℃，攪拌速度為100r·min-1，攪拌時間為30min。(4)最佳精制工藝為

4、：吸附澄清劑法。 結論：通過正交試驗優(yōu)選出了最佳的復方苦參止癢液的制備工藝，該制備工藝穩(wěn)定。 藥品的質量關系到人民的健康，也關系到藥品本身的生存與發(fā)展。專屬性強，簡便且行之有效的質控標準是保證藥品質量的依據(jù)，因此，確定復方苦參止癢液的薄層鑒別和含量測定方法將為復方苦參止癢液的質量控制提供分析方法和理論依據(jù)，具有重要意義。 目的：利用薄層色譜法對復方苦參止癢液處方中蛇床子、苦參、黃連進行定性鑒別；建立復方苦參止癢液

5、中蛇床子素、苦參堿、小檗堿的高效液相色譜含量測定方法。 方法：1.鑒別方法的研究：采用薄層色譜法，選用合適的提取溶劑和方法，找到最適宜的固定相、展開系統(tǒng)、顯色系統(tǒng)等，對處方中的主藥蛇床子、苦參、黃連進行鑒別。 2。蛇床子素、苦參堿的含量測定：①提?。喝∵m量復方苦參止癢液，用氨試液調PH值，置分液漏斗中用氯仿萃取，水浴揮干，殘渣用無水乙醇定容，搖勻，離心，上清液作為供試品溶液。②色譜條件：選擇合適的固定相，調整流動相的組成

6、、配比、流速以使蛇床子素和苦參堿的峰與其它峰完全分離。③系統(tǒng)適用性試驗：在已確定的色譜條件下，考察蛇床子素及苦參堿的分離度、理論板數(shù)、對稱度。④標準曲線的制備：配制系列濃度的蛇床子素和苦參堿對照品溶液，分別進樣測定峰面積。以蛇床子素對照品溶液進樣量、苦參堿對照品溶液進樣量為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標分別繪制標準曲線。⑤最低檢測限試驗：逐步稀釋對照品溶液，進樣，直至色譜峰的峰高為噪聲的三倍。⑥穩(wěn)定性試驗：取供試品溶液分別放置0，2，4，

7、6，8，24h后，按已確定的色譜條件測定峰面積。⑦精密度試驗：取復方苦參止癢液，制備供試品溶液，按已確定的色譜條件重復進樣5次，記錄峰面積。⑧重復性試驗：取同一樣品5份，制備供試品溶液后，測定蛇床子素和苦參堿的含量。⑨加樣回收率試驗：依次取樣品溶液適量，加入蛇床子素和苦參堿，測定它們的含量。3.小檗堿的含量測定：①提?。壕芰咳头娇鄥⒅拱W液于容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻后微孔濾膜過濾，續(xù)濾液做為供試品溶液。②色譜條件：選擇合適的固定

8、相，調整流動相的組成、配比、流速以使小檗堿的峰與其它峰完全分離。⑧系統(tǒng)適用性試驗：在已確定的色譜條件下，考察小檗堿的分離度、理論板數(shù)、對稱度。④標準曲線的制備：配制系列濃度的小檗堿對照品溶液，分別進樣測定峰面積。以小檗堿對照品溶液進樣量為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線。⑤最低檢測限試驗：逐步稀釋對照品溶液，進樣，直至色譜峰的峰高為噪聲的三倍。⑤穩(wěn)定性試驗：取供試品溶液分別放置0，2，4，6，8，24h后，按已確定的色譜條件測定

9、峰面積：⑦精密度試驗：取復方苦參止癢液，制備供試品溶液，按已確定的色譜條件重復進樣5次，記錄峰面積。⑨重復性試驗：取同一樣品5份，制備供試品溶液后，測定小檗堿的含量。⑨加樣回收率試驗：依次取樣品溶液適量，加入小檗堿，測定小檗堿的含量。 結果：1.鑒別方法的研究：蛇床子，采用相應的薄層鑒別方法，薄層展開后均顯示與對照藥材相同的特異性斑點，分離效果好?？鄥ⅲ捎孟鄳谋予b別方法，薄層展開后均顯示與對照藥材相同的特異性斑點，分離效果

10、好。 黃連，采用相應的薄層鑒別方法，薄層展開后均顯示與對照藥材相同的特異性斑點，分離效果好。 2.蛇床子素、苦參堿的含量測定：①提取：取復方苦參止癢液，用氨試液調節(jié)PH值，置分液漏斗中，用氯仿萃取，置水浴揮干，殘渣用無水乙醇溶解并定容容量瓶中，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。②最佳色譜條件：以十八烷基硅烷化硅膠(ODS)為固定相，以甲醇－水－二乙胺(70：30:0.02)為流動相，檢測波長為210nm，流速為1.0m

11、l.·min-1，柱溫33℃，進樣量為20μL。③系統(tǒng)適應性試驗：在上述色譜條件下，蛇床子素和苦參堿的峰形良好，無雜質峰干擾，其理論板數(shù)以蛇床子素計不低于2500，對稱因子為1.05，保留時間為6min左右，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5；以苦參堿計不低于1000，對稱因子為0.98，保留時間為3min左右，與相鄰色譜峰的分離度為大于1.5；④標準曲線的繪制：蛇床子素進樣量在0.22～1.1μg范圍內與峰面積有良好的線性關系，回歸方程

12、為Y=384605X-209951，相關系數(shù)r=0.9990(n=5)?？鄥A進樣量在2.12～10.6μg范圍內與峰面積有良好的線性關系，回歸方程為Y=906475X+1E+06，相關系數(shù)r=0.9993(n=5)。⑤苦參堿的最低檢測限為：10ng。⑥穩(wěn)定性試驗：樣品溶液在24小時內穩(wěn)定。⑦精密度試驗：重復進樣5次后，蛇床子素峰面積的RSD為1.47％和苦參堿峰面積的RSD為0.87％。⑧重復性試驗：蛇床子素的含量為0.093(mg·

13、(10ml)-1)，苦參堿的含量為4.020(mg·(10ml)-1)，重復性良好。⑨加樣回收率試驗：樣品的平均加樣回收率分別為蛇床子素97.8％、苦參堿99.09％，RSD分別為蛇床子素2.97％、苦參堿0.51％。 3.小檗堿的含量測定：①提?。壕芰咳头娇鄥⒅拱W液于容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻后微孔濾膜過濾，續(xù)濾液做為供試品溶液。②最佳色譜條件：以十八烷基硅烷化硅膠(ODS)為固定相，以乙腈-0.1％磷酸(48:52，每100

14、ml流動相中含0.1g十二烷基磺酸鈉)為流動相，檢測波長為365nm，流速為0.8ml·min-1，柱溫30℃，進樣量為20μL。③系統(tǒng)適應性試驗：在上述色譜條件下，鹽酸小檗堿的峰形良好，無雜質峰干擾，其理論板數(shù)以鹽酸小檗堿計不低于1000，對稱因子為1.05，保留時間為11min左右，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5；④標準曲線的繪制：鹽酸小檗堿進樣量在0.2～1μg范圍內與峰面積有良好的線性關系，回歸方程為Y=278330X-997

15、74，相關系數(shù)r=0.9992(n=5)。⑤最低檢測限為：2.0ng。⑥穩(wěn)定性試驗：樣品溶液在24小時內穩(wěn)定。⑦精密度試驗：重復進樣5次后，鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.58％。⑧重復性試驗：鹽酸小檗堿的含量為0.2479mg·m1-1，重復性良好。⑨加樣回收率試驗：樣品的平均加樣回收率為97.81％，RSD為1.25％。 結論：1.苦參、蛇床子、黃連的鑒別方法分離度好，特異性強，重復性好，可作為復方苦參止癢液的鑒別方法。