鮑魚養(yǎng)殖水系中霍亂弧菌基因水平轉移的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、霍亂毒素基因(choleratoxin gene,ctxAB)可以通過溶源性絲狀噬菌體(CTX φ)發(fā)生水平轉移,因此,基因水平轉移在霍亂弧菌(Vibrio cholerae,VC)的進化中有著舉足輕重的作用.隨著致病性VC也是水系中常在菌觀念的確立,環(huán)境因素對ctxAB基因轉移的影響成為人們研究的熱點.故該研究在初步調查致病性VC攜帶溶源性噬菌體的基礎上,建立了追蹤致病基因的原位PCR-流式細胞儀(in situ PCR-flowcy

2、tometry,ISPCR-FCM)分析法.并在鮑魚養(yǎng)殖水系中,運用該方法進行了VC基因水平轉移的初步研究.以絲裂霉素C為誘導劑,調查了VC攜帶溶源性噬菌體的情況.結果表明在絲裂霉素C誘導作用下,約18.75％(3/16)菌株產生攜帶ctxAB基因的絲狀噬菌體CTXφ;一株O139群霍亂弧菌分泌出一種單條型絲狀噬菌體,其性質不詳;未檢測出可以轉移毒素共協(xié)調菌毛(toxin-coregulated pilus,TCP)的溶源性絲狀噬菌體(

3、Vibrio cholerae pathogenicityisland phage,VIP φ).VC經固定和溶菌酶消化處理后,根據常規(guī)PCR確定的擴增參數進行細胞內ctxAB基因的原位擴增.FCM分析顯示陽性率達100%.裂解細菌,獲取擴增產物,瓊脂糖凝膠電泳檢測和測序的結果表明擴增產物是ctxAB基因的序列.多次重復試驗結果一致.該方法的靈敏性達104個/ml.至此,建立了原位檢測細菌內特異基因的ISPCR-FCM分析法.以鮑魚養(yǎng)殖

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