辛基酚致大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞損傷及其機(jī)制的研究.pdf

1、笫一部分辛基酚對(duì)大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞凋亡的影響 為探討OP對(duì)大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞的凋亡作用及其機(jī)制，選取青春期雄性SD大鼠(25-30d)，在建立睪丸Sertoli細(xì)胞體外原代培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上，以30-60μM濃度的OP作用于Sertoli細(xì)胞24小時(shí)或60μMOP作用于Sertoli細(xì)胞6-24小時(shí)。采用透射電鏡、流式細(xì)胞儀和Hoechst染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡及凋亡的發(fā)生率。主要結(jié)果如下： 1.電鏡下，對(duì)照組

2、Sertoli細(xì)胞體積較大，胞質(zhì)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，線粒體和溶酶體常見，細(xì)胞核不規(guī)則，有核裂，單染色質(zhì)豐富，核仁明顯，有時(shí)可以看到1-2個(gè)衛(wèi)星核小體；OP處理組可見大量的、各期的凋亡細(xì)胞，表現(xiàn)為細(xì)胞核染色質(zhì)凝集、邊集，細(xì)胞出現(xiàn)核碎裂，胞質(zhì)出芽等現(xiàn)象以及形成典型的凋亡小體，但細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整。 2.TUNEL分析的結(jié)果顯示，不同濃度OP處理Sertoli細(xì)胞24h后，凋亡細(xì)胞的百分率隨OP濃度的增加而增加。 3.經(jīng)Hoec

3、hst染色，對(duì)照組Sertoli細(xì)胞核大小較均一，染色質(zhì)分布均勻，紫外光下呈藍(lán)色熒光，偶見核縮小和染色質(zhì)濃縮的Sertoli細(xì)胞；60μM的OP處理6-24h后，Sertoli細(xì)胞出現(xiàn)了不同程度的細(xì)胞核皺縮、變形，核染亮藍(lán)色，染色質(zhì)濃縮，呈均勻的致密斑塊或碎片狀，有凋亡小體出現(xiàn)。 4.不同濃度OP染毒24h后，Bcl-2mRNA表達(dá)水平隨染毒濃度的增加呈下降趨勢(shì)，且50和60μMOP處理組表達(dá)水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.

4、0¨，而BaxmRNA表達(dá)水平在50和60μMOP處理組則顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)；60μMOP染毒不同時(shí)間后，Bcl-2mRNA的表達(dá)呈時(shí)間依賴性下降，并于染毒12小時(shí)后顯著低于對(duì)照組(P＜0.05，P＜0.01)，BaxmRNA表達(dá)水平隨著OP染毒時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，且染毒18小時(shí)后表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)。 5.與mRNA的表達(dá)一致，OP染毒后，Bcl-2蛋白表達(dá)水平隨著OP染毒濃度的

5、增加和染毒時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，且50、60μM組及18、24小時(shí)組與對(duì)照組相比差異具有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。Bax蛋白表達(dá)水平在50、60μM組及12、18、24小時(shí)組顯著上升(P＜0.01)。 以上結(jié)果表明，OP可引起Sertoli細(xì)胞的凋亡，其凋亡機(jī)制可能與凋亡相關(guān)因子Bcl-2的下調(diào)和Bax的上調(diào)以及由此引起Caspase-3凋亡通路的激活有關(guān)。 第二部分辛基酚對(duì)大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞DNA的損

6、傷 為研究OP對(duì)大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞DNA的損傷，我們以大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞為研究對(duì)象，在建立睪丸Sertoli細(xì)胞體外原代培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上，以不同濃度的OP(30-60μM)直接作用于Sertoli細(xì)胞24小時(shí)或60μMOP直接作用于Sertoli細(xì)胞6-24小時(shí)。采用彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Sertoli細(xì)胞DNA的損傷，結(jié)果如下： 彗星實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組Sertoli細(xì)胞呈圓形，除自然發(fā)生DNA斷裂的細(xì)胞外，無拖尾現(xiàn)象；

7、各OP染毒組的Sertoli細(xì)胞均發(fā)生了不同程度的拖尾；隨著OP劑量的增加以及染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，尾DNA﹪和olive尾矩(OTM)值呈上升趨勢(shì)，與對(duì)照組相比染毒組變化有顯著性差異(P＜0.01)。 結(jié)果表明，OP能引起Sertoli細(xì)胞DNA的損傷。 第三部分辛基酚對(duì)大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞功能的影響 為研究OP對(duì)大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞功能的影響，我們以大鼠睪丸Sertoli細(xì)胞為研究對(duì)象，在建立睪丸Ser

8、toli細(xì)胞體外原代培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上，以不同濃度的OP(30-60μM)直接作用于Sertoli細(xì)胞24小時(shí)或60μMOP直接作用于Sertoli細(xì)胞6-24小時(shí)。 1.不同濃度的OP作用于Sertoli細(xì)胞24h后，各劑量組細(xì)胞活性與對(duì)照組相比呈下降趨勢(shì)，并且40-60μMOP顯著降低了Sertoli細(xì)胞的活性(P＜0.01)；60μMOP能引起Sertoli細(xì)胞活性呈時(shí)間依賴性下降，并在OP作用于Sertoli細(xì)胞12h以后