胚胎肝細胞分化因子—10（ELDF-10）的克隆表達及功能的初步研究.pdf

1、　　為了研究ELDF10基因在DS19細胞中的功能。首先，將ELDF10的編碼區(qū)克隆到真核表達載體pEGFP-N1中，表達融合蛋白。利用Lipofectin法轉染到MEL-DS19中，使DS19細胞過表達ELDF10蛋白，觀察是否對腫瘤細胞的增殖和分化有影響，初步探討ELDF10基因在DSλ9細胞中的功能?！　∞D染的重組真核表達載體和空載體，經(jīng)G418篩選得到穩(wěn)定表達抗性克隆。　　用RT-PCR方法在mRNA水平檢測轉染重組質粒、轉

2、染空載體和正常腫瘤細胞中ELDF10基因的表達，以在組織中恒定表達的GAPDH為對照，結果轉染重組質粒細胞中ELDF10mRNA表達量增加?！　y定三種細胞的生長曲線，發(fā)現(xiàn)在這三種細胞中，轉染空載體的細胞生長速度明顯低于轉染重組質粒和正常的腫瘤細胞，轉染重組質粒的生長速度比正常DS19細胞略有增加，說明空載體在腫瘤細胞中表達GFP蛋白對細胞生長有明顯的抑制作用，但與GFP融合表達的重組蛋白對腫瘤細胞有促進增殖作用?！　×魇郊毎麅x檢測

3、細胞周期發(fā)現(xiàn)，轉染重組質粒的細胞較轉染空載體和正常細胞G1期細胞減少，G2期細胞增多，表明ELDFi0-GFP融合蛋白可以減少細胞增殖周期時間，促進細胞增殖?！　÷?lián)苯胺染色陽性是細胞分化成熟的一個標志，對三種細胞進行聯(lián)苯胺染色，觀察有無血紅蛋白在胞漿中表達，結果均為陰性。說明ELDF10-GFP融合蛋白可能沒有誘導細胞分化作用?！　T-PCR在mRNA水平檢測β珠蛋白的表達，以GAPDH為對照，結果轉染重組質粒細胞中β珠蛋白的表達