生長追趕IUGR大鼠骨骼肌PGC-1α的DNA甲基化和基因表達.pdf

1、背景和目的:宮內(nèi)發(fā)育遲緩(intrauterine growth retardation,IUGR)尤其是伴隨生后出現(xiàn)生長追趕(catch-up growth IUGR,CG-IUGR)的個體易發(fā)生胰島素抵抗,而過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)的共激活因子-1α(PGC-1α)是營養(yǎng)和能量代謝的關鍵調(diào)控點,我們推測CG-IUGR大鼠骨骼肌中PGC-1α啟動子的DNA甲基化及PGC-1α基因的表達水平可能發(fā)生了改變并在生長追趕及胰

2、島素抵抗發(fā)生機制中起著重要作用。
　　方法:將SPF級別的受孕第一天的SD雌鼠隨機分為正常飲食組和限食組,對限食組母鼠孕期全程限制飼料(約相當于母鼠孕期正常食量的30％)并減少每窩仔鼠數(shù)量以建立CG-IUGR模型。于大鼠8周齡時處死并取其后肢骨骼肌,提取RNA、蛋白及DNA。用實時熒光定量PCR(realtime PCR)和免疫印跡(western blot)法檢測PGC-1α的mRNA及蛋白表達水平;對DNA進行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化,

3、將轉(zhuǎn)化后的模板用于PCR擴增PGC-1α啟動子序列,用焦磷酸測序(pyrosequencing)的方法分析PGC-1α啟動子上-803、-787、-582、-326、-215、-186及-178位點的甲基化水平。
　　結(jié)果:8周齡的CG-IUGR大鼠骨骼肌組織中PGC-1α在mRNA和蛋白水平上均小于正常組(p<0.05),PGC-1α啟動子上-803位點和-787位點的甲基化水平高于對照組(p<0.01)。大鼠體質(zhì)指數(shù)(BMI)

4、和PGC-1α啟動子上-803位點(r=0.803)及-787位點(r=0.836)的甲基化水平呈正相關(p<0.01),BMI和PGC-1α的mRNA水平呈負相關(r=-0.764,p<0.05)。但PGC-1α的mRNA水平和PGC-1α啟動子的-803位點和-787位點的甲基化水平無直線相關關系(p>0.05)。
　　結(jié)論:CG-IUGR大鼠骨骼肌PGC-1α啟動子特異位點甲基化水平及PGC-1α表達量發(fā)生了改變,并均與BM