降糖藥物二甲雙胍和Exendin-4對骨代謝的影響.pdf

1、目的：探討降糖藥物二甲雙胍、exendin-4對原代骨髓基質干細胞和成骨細胞分化的影響及其可能作用機制。
　　 方法：采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離純化大鼠骨髓基質干細胞，細胞鋪板后約90％匯合時加入成骨誘導液，實驗組同時加入降糖藥物（二甲雙胍或exendin-4），分別于不同培養(yǎng)時間收集細胞采用Real-time PCR方法檢測成骨標志基因的表達，ALP活性采用蛋白定量方法進行驗證，并進行ALP染色。礦化結節(jié)采用茜素紅染色。成脂誘導

2、待細胞完全匯合后加入成脂誘導液，實驗組同時加入降糖藥物（二甲雙胍或exendin-4），于14天收集細胞采用Real-time PCR方法檢測成脂標志基因的表達，脂滴進行油紅O染色。Western blot方法檢測Wnt通路中相關蛋白的表達及其磷酸化水平的變化。取原代大鼠成骨細胞，細胞約90％匯合后加入成骨誘導液，實驗組同時加入二甲雙胍，ALP活性采用蛋白定量方法，茜素紅染礦化結節(jié)，并分別于不同培養(yǎng)時間收集細胞檢測成骨標志基因的表達。<

3、br>　　 結果：在骨髓基質干細胞成骨分化中晚期，二甲雙胍顯著提高成骨細胞相關基因的表達，促進礦化結節(jié)的形成，并抑制成脂分化相關基因的轉錄，以及脂肪細胞內(nèi)脂滴的形成。同時，在原代成骨細胞，二甲雙胍具有促進前成骨細胞向成熟成骨細胞分化及礦化的作用。隨著二甲雙胍作用時間的延長，β-catenin在胞漿內(nèi)穩(wěn)定聚集。Exendin-4顯著提高BMSCs成骨分化早期ALP活性，Runx2以及Col-Ι的表達，抑制成脂分化相關基因的轉錄，并抑制脂