降糖藥物二甲雙胍和Exendin-4對骨代謝的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討降糖藥物二甲雙胍、exendin-4對原代骨髓基質干細胞和成骨細胞分化的影響及其可能作用機制。
   方法:采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離純化大鼠骨髓基質干細胞,細胞鋪板后約90%匯合時加入成骨誘導液,實驗組同時加入降糖藥物(二甲雙胍或exendin-4),分別于不同培養(yǎng)時間收集細胞采用Real-time PCR方法檢測成骨標志基因的表達,ALP活性采用蛋白定量方法進行驗證,并進行ALP染色。礦化結節(jié)采用茜素紅染色。成脂誘導

2、待細胞完全匯合后加入成脂誘導液,實驗組同時加入降糖藥物(二甲雙胍或exendin-4),于14天收集細胞采用Real-time PCR方法檢測成脂標志基因的表達,脂滴進行油紅O染色。Western blot方法檢測Wnt通路中相關蛋白的表達及其磷酸化水平的變化。取原代大鼠成骨細胞,細胞約90%匯合后加入成骨誘導液,實驗組同時加入二甲雙胍,ALP活性采用蛋白定量方法,茜素紅染礦化結節(jié),并分別于不同培養(yǎng)時間收集細胞檢測成骨標志基因的表達。<

3、br>   結果:在骨髓基質干細胞成骨分化中晚期,二甲雙胍顯著提高成骨細胞相關基因的表達,促進礦化結節(jié)的形成,并抑制成脂分化相關基因的轉錄,以及脂肪細胞內(nèi)脂滴的形成。同時,在原代成骨細胞,二甲雙胍具有促進前成骨細胞向成熟成骨細胞分化及礦化的作用。隨著二甲雙胍作用時間的延長,β-catenin在胞漿內(nèi)穩(wěn)定聚集。Exendin-4顯著提高BMSCs成骨分化早期ALP活性,Runx2以及Col-Ι的表達,抑制成脂分化相關基因的轉錄,并抑制脂

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