基于絲氨酸蛋白酶催化中心的寡聚核苷酸化學修飾研究.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院博士學位論文基于絲氨酸蛋白酶催化中心的寡聚核苷酸化學修飾研究姓名：梁遠軍申請學位級別：博士專業(yè)：藥物化學指導教師：劉克良20060501軍事醫(yī)學科學院博ij學位論文摘要基于絲氨酸蛋白酶催化中心的寡聚核苷酸化學修飾研究摘要DNA分子精確識別、精確組裝等獨特性質(zhì)以及核酸相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，使得DNA作為優(yōu)秀的自組裝分子得到廣泛應(yīng)用，化學修飾則賦予了DNA更多生物學功能。眾多蛋白酶雖然功能各異，但它們具有共同的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)

2、，即一級結(jié)構(gòu)均為聚酰胺結(jié)構(gòu)。側(cè)鏈基團的不同，產(chǎn)生了酶功能的多樣性，因此氨基酸殘基側(cè)鏈基團對酶功能具有結(jié)構(gòu)學意義。絲氨酸蛋白水解酶家族成員乙酰膽堿酯酶、Ⅱ糜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶的催化中心具有相似的結(jié)構(gòu)特征，即由絲氨酸、組氨酸、天冬氨酸(谷氨酸)組成的催化三聯(lián)體。也可認為，絲氨酸提供的羥基、組氨酸提供的咪唑基、天冬氨酸(谷氨酸)提供的羧基組成的精細三維結(jié)構(gòu)在催化行為中起著關(guān)鍵作用。因此，抽提出活性中心的側(cè)鏈基團羥基、咪唑基和羧基，可作為模

3、擬絲氨酸蛋白水解酶的功能域。本課題以化學修飾為手段，將上述功能基包括羥基、咪唑基等基團以烷基化或烷氧基化形式連接于磷酸殘基，獲得了修飾的亞磷酰胺單體14個。用這些單體分別設(shè)計合成了10個dT5寡聚核苷酸模型序列，研究了功能化單體在寡聚核苷酸合成中的穩(wěn)定性，并提出了磷酸殘基修飾寡聚核苷酸合成的合成策略。據(jù)此，初步設(shè)計合成修飾寡聚核苷酸序列并研究了其雜交性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)修飾寡聚核苷酸序列導致Tm值的輕微降低。本工作為基于DNA分子組裝模擬絲氨酸蛋