日本血吸蟲抗原T細胞表位的篩選與鑒定.pdf

1、該研究運用生物信息學方法分析和預測日本血吸蟲線粒體相關蛋白(Sj338)、22.6 kDa膜相關抗原(Sj22.6)、磷酸丙糖異構酶(SjTPI)和97 kDa副肌球蛋白(Si97)的T細胞表位,設計并合成候選表位的編碼核苷酸,定向克隆入融合表達載體pET-32c(+),誘導表達硫氧還蛋白(Trx)融合蛋白.候選表位融合蛋白純化后體外刺激小鼠淋巴細胞,經淋巴細胞增殖實驗和細胞因子分泌實驗鑒定出若干能誘導Th1型細胞因子產生的T細胞表位.

2、其中P4(來源于Sj22.6)、P18(來源于SjTPI)和P22(來源于Sj97)能夠誘導較強的淋巴細胞增殖和Th1型細胞因子產生.同時對此三個T細胞表位進行了同源性分析,并進一步對P4、P22的免疫原性及P18與自然感染血吸蟲小鼠淋巴細胞的反應性進行了研究.第—部分:日本血吸蟲抗原T細胞表位的預測、基因重組、表達及純化根據(jù)Sj22.6、Sj338、SjTPI和Sj97的氨基酸序列,用TEPITOPE、SYFPEITHI等計算機軟件預

3、測其T細胞表位,確定了候選表位14個.第二部分日本血吸蟲抗原T細胞表位的鑒定為鑒定血吸蟲特異性的T細胞表位,首先以日本血吸蟲照射尾蚴免疫C3H/HeJ及C57BL/6小鼠,5周后分別以rSi22.6、rSi338、rSiTPI和SWAP加不完全福氏佐劑(IFA)尾基部皮下注射加強免疫.7~10天后無菌取腹股溝淋巴結及脾臟,制備淋巴細胞懸液.用純化的候選表位融合蛋白與上述細胞共培養(yǎng),<'3>H-TdR摻入法檢測其增殖.結果顯示,候選表位融

4、合蛋白中大部分可刺激致敏淋巴細胞增殖而不能刺激小鼠幼稚淋巴細胞增殖,表明候選表位中大部分為日本血吸蟲特異性T細胞袁位.總之,該研究運用生物信息學結合淋巴細胞增殖及細胞因子分泌實驗,從Sj22.6、SjTPI、Sj97中鑒定出若干T細胞表位.我們采用的計算機預測與動物實驗相結合鑒定T細胞表位的策略,為國內外首次將計算機預測表位的方法運用于寄生蟲學領域,具有方便、快速且花費較低的優(yōu)點.對重組肽和合成肽的動物實驗結果對比后發(fā)現(xiàn)表位肽與Trx融