局部低溫對大鼠脊髓體感誘發(fā)電位的影響及其安全性研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 脊髓損傷是指由于各種原因造成脊髓運動、感覺和（或）自主神經功能暫時性或永久性的減退或喪失，是外傷患者主要的死亡和致殘原因之一。脊髓損傷在給患者自身的生活質量造成極大影響的同時，也嚴重阻礙了社會的進步及發(fā)展，并給醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)帶來了極大壓力。
　　 目前，治療脊髓損傷主要依賴外科手術及藥物治療，包括糖皮質激素、神經節(jié)甘脂以及興奮性氨基酸拮抗劑等。雖然不時有報道證明各類藥物在實驗室水平具有神經保護和促進

2、神經功能恢復的作用，但是臨床層面的實用價值和療效仍缺乏權威性的支持，且患者的遠期恢復情況較前并未出現(xiàn)明顯改善。低溫作為一種物理性干預手段，其治療作用早在上世紀中期就已被學者所證實，雖然全身低溫技術在脊髓損傷后的神經保護作用已被眾多研究所證明。但其容易導致核心溫度過低，進而引起心律失常，呼吸、泌尿系統(tǒng)感染以及出血傾向等致命性并發(fā)癥的缺點逐漸暴露，并限制了其在臨床的進一步應用。為此有學者提出用局部低溫代替全身低溫，以降低并發(fā)癥的發(fā)生率。雖然

3、目前已有報道將局部低溫應用于體外循環(huán)術中以減輕或避免脊髓出現(xiàn)缺血性損傷的報道，但是針對脊髓損傷的研究及應用卻鮮見，一方面原因在于相關技術的不成熟，更主要的尚沒有任何文獻對局部低溫的安全性缺乏全面的論證。體感誘發(fā)電位對損傷刺激反應敏感，其監(jiān)測結果不僅能反應脊髓后柱的情況，更能全面了解脊髓的整體功能。但體感誘發(fā)電位容易受外界環(huán)境干擾，其中對溫度最為敏感，輕微的溫度波動即可導致體感誘發(fā)電位波形發(fā)生變化。
　　 本研究即以脊髓體感誘發(fā)電

4、位為主要監(jiān)測指標，通過觀察體感誘發(fā)電位在不同局部溫度下的變化情況，同時結合組織學及行為學評價，討論局部低溫的神經安全性問題。以此為局部低溫領域將來的研究奠定安全性方面的支持。
　　 研究方法及結果：
　　 一、大鼠局部硬膜外低溫動態(tài)干預模型的構建
　　 以體重在200-220g的SD大鼠作為實驗動物，使用10％水合氯醛(3.5ml/kg)進行腹腔麻醉后以T10作為目標節(jié)段實施單節(jié)段椎板咬除術，注意保持硬脊膜的完整

5、并保證脊髓不受到損傷。置入微型溫度探頭并使其緊貼但不壓迫硬脊膜;另兩枚溫度探頭分別監(jiān)測肛溫和室溫。兩條低溫液引流管分別從兩旁固定于T10水平的椎旁肌上形成液體對流模型，其中一條引流管外接4℃生理鹽水。成功置管后用4-0手術縫線緊密肌肉。通過隨機選取不同的溫度值，檢測模型的可行性與準確性。
　　 二、不同程度局部低溫對體感誘發(fā)電位的影響
　　 按第一部分實驗的方法建立局部低溫干預模型，將一對針型記錄電極分別插入T7-T8，

6、T8-T9的棘突韌帶;將另一對電極分別置于兩眉弓連線中點及兩耳根連線中點，作為FPZ和CZ點;兩對刺激電極分別刺入雙后肢肌肉;參考電極置于皮下。在記錄初始誘發(fā)電位后，通過調整4℃生理鹽水的流速，使局部硬膜外溫度在5min之內分別降至30℃、26℃、22℃及18℃，并在各溫度水平上保持30min后記錄雙后肢體感誘發(fā)電位。隨后停止灌注開始自然復溫，待溫度穩(wěn)定后再次描記復溫后電位情況。
　　 研究結果發(fā)現(xiàn)體感誘發(fā)電位的N1-P2振幅在

7、各個低溫點均出現(xiàn)明顯壓低(P＜0.01)，而N1-P2潛伏期在30℃-22℃之間的各溫度點上未見明顯變化(P＞0.05)，僅在18℃時出現(xiàn)顯著延長(P＜0.05)。潛伏期和振幅在復溫后均恢復至降溫前水平(P＞0.05)。
　　 三、局部低溫的神經安全性研究
　　 （一）后肢運動功能評分實驗大鼠分別在術前、麻醉徹底清醒后及術后第1、7、14天使用BBB后肢運動評分表進行盲法評分。
　　 （二）H&E染色及Fluor

8、o-Jade C染色分析術后第1、7、14天分別進行常規(guī)灌注及4％多聚甲醛灌注固定，取出干預節(jié)段(T10)及其上、下各一個節(jié)段（T9和T11）共3部分脊髓作為標本，行冰凍切片后分別進行標準HE染色，并在顯微鏡下觀察脊髓組織形態(tài)。同時進行Fluoro-JadeC染色觀察灰、白質內神經細胞死亡情況，并在熒光顯微鏡下對陽性細胞進行計數(shù)統(tǒng)計。
　　 結果顯示，所有實驗動物在各時間點上評分均為21分。H&E染色未見明顯神經元細胞變性、壞死

9、，無明顯炎癥細胞浸潤，脊髓組織完整性好;Fluoro-Jade C熒光染色無明顯陽性細胞，與非干預節(jié)段比較均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 本研究成功建立了大鼠脊髓局部硬膜外動態(tài)低溫模型。該模型借助微探針溫度監(jiān)測儀，通過調節(jié)低溫液體流速實現(xiàn)脊髓局部硬膜外的連續(xù)變溫。本研究還在該模型基礎上進一步完成了對同一實驗個體在不同的局部溫度下體感誘發(fā)電位的反復記錄。
　　 本課題主要論證了局部低溫可抑制正