基于三維組織培養(yǎng)的肺腺癌血清標(biāo)志物的篩選和鑒定.pdf

1、肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率第一位的惡性腫瘤。晚期肺癌患者5年生存率低于10％，而早期肺癌患者經(jīng)過(guò)積極的治療，5年生存率可以達(dá)到80％以上。在目前醫(yī)療水平下，早診斷早治療是能夠顯著提高肺癌長(zhǎng)期生存率的唯一辦法。由于肺癌患者發(fā)現(xiàn)癥狀時(shí)大都已經(jīng)進(jìn)入中晚期，因此要在癥狀出現(xiàn)前就診斷肺癌只能依靠人群的篩查。血清學(xué)篩查是經(jīng)濟(jì)而簡(jiǎn)便的手段，易為人所接受。盡管由于技術(shù)和方法學(xué)上的限制，目前血清學(xué)檢查在肺癌的診斷方面意義不大。但通過(guò)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，可能

2、會(huì)在肺癌血清標(biāo)志物的研究上有新的進(jìn)展。這不僅對(duì)于肺癌的診斷有重要意義，還可能找到新的肺癌治療靶點(diǎn)，對(duì)肺癌的治療也產(chǎn)生重要影響。本研究的目的就是篩選可能有意義的肺腺癌的血清標(biāo)志物。 方法：本研究主要由三個(gè)部分構(gòu)成。第一章是構(gòu)建基于鼠尾膠原的三維培養(yǎng)平臺(tái)。使用光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡、免疫組織化學(xué)法和腫瘤移植來(lái)判斷在此平臺(tái)中的組織細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。第二章是采用差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)來(lái)分析三維培養(yǎng)條件下肺腺癌和正常肺組織培養(yǎng)液中蛋白含量的差異

3、，對(duì)發(fā)現(xiàn)的差異蛋白使用MALDI-TOF-MS進(jìn)行初步鑒定。第三章是對(duì)第二章中初步鑒定的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行WesternBlot的篩選，選取表達(dá)差異最大的蛋白質(zhì)為研究對(duì)象，采用ELISA檢測(cè)160例不同類(lèi)型血清(來(lái)源包括肺腺癌患者、肺鱗癌患者、肺小細(xì)胞癌患者、肺良性腫瘤患者、其它部位惡性腫瘤患者和健康人)中目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況，初步了解它在肺腺癌診斷中的意義。 結(jié)果：在構(gòu)建的以鼠尾膠原為基質(zhì)的三維培養(yǎng)模型中，肺腺癌組織和正常肺組織生長(zhǎng)

4、良好。通過(guò)四次三個(gè)對(duì)照組的二維電泳共得到考染凝膠圖像12張和銀染凝膠圖像3張。得到的圖像重復(fù)性好，可比性高。采用PDquest軟件分析比較考染圖像，共發(fā)現(xiàn)差異蛋白點(diǎn)19個(gè)，鑒定出14個(gè)。同時(shí)鑒定11個(gè)表達(dá)無(wú)差異的牛屬蛋白質(zhì)。得到鑒定的差異蛋白中，目前發(fā)現(xiàn)與腫瘤相關(guān)的是磷酸丙糖異構(gòu)酶、核苷二磷酸激酶A、膜聯(lián)蛋白A1、膜聯(lián)蛋白A2、凝集素-3、半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶P這八種。經(jīng)Western Bl

5、ot驗(yàn)證，在二維電泳時(shí)發(fā)現(xiàn)的表達(dá)增高的六種差異蛋白質(zhì)中，僅有凝集素-3、半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶在腺癌組織培養(yǎng)液上清和肺腺癌患者的血清中表達(dá)增高，以半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白增高最為明顯。ELISA顯示半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白在肺腺癌和肺鱗癌患者的血清中表達(dá)水平高于它在小細(xì)胞肺癌、肺良性腫瘤、其它腫瘤患者和健康人血清中的水平(p<0.05)。受試者操作特征曲線(xiàn)顯示在最大檢測(cè)效能時(shí)，PACAP檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(包括腺癌和

6、鱗癌)的敏感性和特異性分別為80.0％和57.3％。 結(jié)論：構(gòu)建的基于鼠尾膠原的體外三維培養(yǎng)模型，可以很好地模擬肺腺癌組織和正常肺組織的體內(nèi)生長(zhǎng)情況.有可能為相關(guān)研究提供簡(jiǎn)便實(shí)用的研究平臺(tái)。將三維培養(yǎng)技術(shù)與蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)結(jié)合起來(lái)篩選肺腺癌血清標(biāo)志物是可行的。它也為其它腫瘤血清標(biāo)志物的篩選提供了新的思路。肺腺癌和鱗癌患者血清中存在半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白，且其濃度與小細(xì)胞肺癌患者、健康人、肺部良性腫瘤患者及其它部位腫瘤患者血清中此