丹酚酸B與銀杏葉提取物EGb761的藥理作用比較及其相關的作用機制研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高和醫(yī)療條件的改善，世界上許多國家的人均壽命有所延長，因而老齡人群的比例逐漸增大，隨之而來的就是神經退行性疾病的發(fā)病率逐年上升。神經退行性疾病分為慢性和急性兩類，由于其發(fā)病機制復雜，發(fā)病原因至今尚不清楚。阿爾茨海默病(AD)是一種最常見的慢性神經退行性疾病，以漸進性的記憶力和認知功能障礙為主要特征；而腦缺血為急性神經退行性疾病，常見的臨床表現為神經功能缺損。這兩種疾病的病理改變雖然不同，但存在某些共同的神經損傷機制，

2、如氧化應激、鈣穩(wěn)態(tài)失調、興奮性氨基酸毒性等。 本研究工作利用多種神經損傷模型，對SaIB和EGb761的藥理作用進行比較，以評價SaIB的神經保護作用，并對SaIB可能的作用機制進行了初步的探討。 第一部分：SaIB與EGb761抗氧化活性的比較1、SaIB與EGb761對超氧陰離子(O2·-)清除作用的比較兩種體外反應體系用來產生O2·-：黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系，是體外產生O2·-最常用的方法，而且它類似于生物體內產生

3、O2·-的過程；PMS/NADH體系是很重要的一種非酶體系產生O2·-的方法。 2、SaIB與EGb761對羥基自由基(·OH)清除作用的比較Fenton反應體系用來產生·OH，采用兩種不同的方法對·OH進行測定：高效液相電化學檢測器(HPLC-ECD)和分光光度法。 3、SaIB和EGb761對大鼠微粒體脂質過氧化抑制作用的比較密度梯度離心法制備線粒體，維生素C-NADPH體系誘發(fā)脂質過氧化，用TBA比色法測定脂質過氧

4、化產物MDA的含量。IB對微粒體脂質過氧化的抑制作用強于EGb761。 4、SaIB和EGb761對過氧化氫(H2O2)損傷神經細胞的保護作用比較以H2O2損傷SH-SY5Y細胞為氧化應激損傷神經元模型，觀察SaIB和EGb761對H2O2導致的神經細胞損傷的保護作用。 第二部分：SaIB與EGb761對體外培養(yǎng)神經細胞損傷的保護作用比較1、β-淀粉樣蛋白(Aβ)引起的神經細胞損傷及藥物的保護作用為了比較SaIB和EG

5、b761對Aβ纖維形成及細胞毒作用的影響，運用ThT熒光法和電子顯微鏡技術分析了SaIB和EGb761對Aβ1-40聚集和纖維形成的影響；另將Aβ25-35預先老化7天，用MTT法和流式細胞儀檢測兩種提取物對此老化蛋白造成的PC12細胞毒性的保護作用，用DCF熒光法觀察Aβ25-35作用后細胞內活性氧含量的變化以及兩種提取物的作用。 2、崗田酸(OA)引起的神經細胞損傷及藥物的保護作用本實驗以OA損傷SH-SY5Y細胞作為類似A

6、D的細胞模型，觀察SaIB和EGb761對OA造成神經細胞損傷的影響。 3、去血清誘導的神經細胞凋亡及藥物的保護作用以去血清誘導SH-SY5Y細胞凋亡作為一種氧化應激的體外模型，觀察SaIB和EGb761這兩種抗氧化劑是否對去血清造成的神經細胞損傷具有保護作用。 4、鈣離子載體誘發(fā)的神經細胞凋亡用鈣離子載體lonomycin引起SH-SY5Y細胞內鈣超載而誘導凋亡，觀察SaIB和EGb761這兩種抗氧化劑是否對這種損傷具

7、有保護作用。 第三部分：SaIB與EGb761對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用比較采用栓線法制備大腦中動脈阻斷(MCAO)模型，2小時后將尼龍線拔出而再灌，縫合傷口，再灌注24小時。藥物治療組再灌注同時靜脈注射7.5和15mg/kgSaIB或者50和100mg/kgEGb761。 第四部分：SaIB神經保護作用的機制研究Aβ和腦缺血都能導致p35→p25裂解增加，而p25的含量增加可以持續(xù)激活CDK5，從而使細胞骨架破壞

8、，細胞死亡。鈣激活蛋白酶(Calpain)是p35→p25裂解的關鍵蛋白酶。本實驗用鈣離子指示劑Fura-2/AM檢測了細胞內的鈣離子濃度，蛋白印跡法分析了p35和p25蛋白的表達變化。 從以上SaIB和EGb761藥理作用的比較可以看出，SaIB在實驗性AD和腦缺血模型中均顯示了良好的神經保護作用，而抗氧化作用是其重要的作用機制。我們相信，隨著現代醫(yī)學的發(fā)展和研究的深入，必將進一步揭示SaIB的作用機理，擴大其應用范圍，為防治