CXCR4下調對乳腺癌轉移影響的初步研究.pdf

1、分類號；R 7 3 0 ．2碩士研究生學位論文Y 7 6 2 6 7 6 、單位代碼：1 1 9 0 4學 號：2 0 0 2 2 0 1 2C X C R 4 下調對乳腺癌轉移影響的初步研究T h e P r e l i m i n a r yS t u d y o n E f f e c t o fD o w n —r e g u l a t i o no f C X C I Ⅵo n B r e a s tC a n c e r

2、M e t a s t a s i s專業(yè)：生物化學及分子生物學研究生：李臣賓導師：牛瑞芳研究員天津醫(yī)科大學二零零五年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文篩選轉染成功的細胞，進行克隆化，擴大培養(yǎng)。用流式細胞儀從蛋白質水平檢測C X C R 4 表達率，用實時熒光定量P C R 從轉錄水平檢測C X C R 4 基因表達受抑制情況。第二部分：選用M T T 法繪制細胞的生長曲線和平板克隆形成實驗對細胞的增殖能力進行觀察；應用流式細胞術檢測了細胞的

3、早期凋亡情況；采用M a t r i g e l I n v a s i o nC h a m b e r s 實驗對細胞的遷移能力和侵襲力進行了衡量。最后，應用實時熒光定量P C R 檢測了E ．鈣粘蛋白( E ．c a d h e r i n ，E —c a d ) 、胰島素樣生長因子結合蛋白5 ( i n s u l i n —l i k e g r o w t h f a c t o r - b i n d i n g p r

4、o t e i n 5 ．I G F B P - 5 ) 、纖維粘連蛋白( f i b r o n e c t i n ，F(xiàn) N ) 和基質金屬蛋白酶一2 ( M a r t i xm e t a l l o p r o t e i n a s e - - 2 ，M M P - 2 ) 等與乳腺癌轉移相關基因的表達情況。結果：第一部分：1 成功地構建了四種能夠表達s i R N A 的質粒p S l i e n e e r 3 ．1 一

5、H 1n e o ／s i R N A ，通過限制型內切酶酶切圖譜和測序分析，證實插入載體的核苷酸序列和設計完全符合。2 轉染四種純化后的質粒到T 4 7 D 細胞中，經(jīng)( 3 4 1 8 篩選出了三種轉染成功的細胞( T 4 7 D ／s i R N A l 、T 4 7 D ／s i R N A 3 和T 4 7 D ／s i R N A 4 ) 。3 經(jīng)流式細胞儀檢測，親本T 4 7 D 細胞的C X C R 4 表達率為6 9

6、．o o ％，T 4 7 D ／s i R N A l 、T 4 7 D ／s i R N A 3 和T 4 7 D ／s i R N A 4 等三種轉染后的細胞的表達率分別為4 ．9 5 ％、1 1 ．1 0 ％和5 ．5 3 ％。經(jīng)統(tǒng)計學處理認為，親本T 4 7 D 細胞的C X C R 4 表達率與三種轉染后的細胞比較差異有顯著性( P0 ．0 5 ) 。4 實時熒光定量P C R 檢測結果是T 4 7 D ／s i R N A