互隔交鏈孢酚對NIH3T3細胞中DNA聚合酶β基因的致突變作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：在于觀察互隔交鏈孢酚對NIH3T3細胞中DNA聚合酶β基因突變的影響，探討互隔交鏈孢酚致癌可能的機制，并為進一步研究polβ的生物學功能和特性研究提供實驗依據(jù)。　　方法：將本研究室凍存的NIH3T3細胞復蘇后培養(yǎng)，待其生長情況良好，用含有不同濃度的互隔交鏈孢酚(AOH)的培養(yǎng)液作用于NIH3T3細胞，分為五組：①正常細胞組；②AOH濃度為2μmol/L組；③AOH濃度為4μmol/L組；④AOH濃度為8μmol/L組；⑤AOH濃

2、度為16μmol/L組。首先提取細胞的總RNA，用RT-PCR方法從細胞總RNA中擴增出DNA聚合酶β基因cDNA序列，應用T-A克隆技術，克隆至pGEM-Teasy載體后，選用JM109菌株，用氯化鈣法制備感受態(tài)細菌，將目的基因轉(zhuǎn)入宿主細菌內(nèi)，藍白篩選、通用引物擴增鑒定后，送上海生物工程公司進行測序，用DNASIS、OMIGA軟件分析序列變化，與GenBank中DNA聚合酶β基因序列進行比較，分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及其變化。同時從細胞總RNA

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