海桐皮抗腫瘤有效部位制備工藝及質(zhì)量研究.pdf

1、本論文分為三部分：第一部分文獻綜述對用作海桐皮的不同植物來源的品種、化學(xué)成分、藥理活性研究現(xiàn)狀進行了綜述。 第二部分海桐皮有效部位的實驗研究1.對四川產(chǎn)海桐皮進行了對照品研究。經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析和制備HPLC法分離得到一個皂苷類化合物單體49.5mg，利用波譜技術(shù)(包括UV，IR,MS,1H-NMR,13C-NMR)鑒定其結(jié)構(gòu)為：常春藤皂苷元-3-O-α-L-鼠李吡喃糖-(1→2)-α-L-阿拉伯吡喃糖苷，經(jīng)HPLC法測定純度為

2、99.2％。 2.建立了海桐皮有效部位的制備方法。首先優(yōu)化了海桐皮有效部位的提取工藝，以總皂苷含量為指標(biāo)對提取工藝進行優(yōu)化，經(jīng)正交實驗考察，確定最佳提取工藝為：確定最佳提取工藝為Q1％乙醇、用量為8倍量、提取2小時。繼而對大孔樹脂分離富集有效部位的工藝進行了篩選及優(yōu)化。以總皂苷含量為指標(biāo)，對樹脂類型進行篩選，結(jié)果A樹脂對有效部位中總皂苷吸附量大，解吸容易，有效部位的總皂苷含量高。通過對上樣量與樹脂體積的比、洗脫劑、層析柱徑高比、

3、上樣液濃度、上樣流速、洗脫流速、洗脫體積及使用壽命等參數(shù)的考察，確定最佳凈化工藝為：樹脂體積和上樣體積的最佳比例為1：3.5，上樣液濃度為20mg/ml，洗脫劑為Q3％乙醇，層析柱的D/L為1：5，吸附流速為1ml/min，洗脫流速為3ml/min，層析樹脂至少可以重復(fù)使用8次。在優(yōu)化的提取純化工藝條件下制備了10批有效部位。 3.建立了有效部位的HPLC指紋圖譜檢測方法。精密度實驗考察結(jié)果表明：各共有峰相對保留時間的RSD在0

4、.5-2.41％之間，峰面積比值的RSD6.28-7.78％；穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明：供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定；重復(fù)性實驗結(jié)果表明：各共有峰相對保留時間的RSD在0.15-1.07％，峰面積比值的RSD在4.02-5.01％。 4.建立了海桐皮提取物和有效部位中總皂苷的含量測定方法。采用香草醛—高氯酸比色法對海桐皮有效部位的總皂苷含量測定進行了方法學(xué)考察，并對藥材提取物和10批有效部位進行了含量測定。以常春藤配基-3-O-α-L-鼠李

5、吡喃糖-(1→2)-α-L-阿拉伯吡喃糖苷為對照品，實驗結(jié)果表明取樣量在0.1～0.4mg之間時線性關(guān)系良好，回歸方程為：y=2.0025x+0.0269，r=0.9991；加樣回收率為95.06％，RSD為2.15％。精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性實驗結(jié)果也均符合要求。測定有效部位總皂苷平均含量為66.25％，RSD為2.16％，藥材提取物中總皂苷的平均含量為45.24％，RSD為1.00％。 5.建立了海桐皮有效部位中常春藤配基-3

6、-O-α-L-鼠李吡喃糖-(1→2)-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(皂苷A)的HPLC含量測定方法，并對藥材提取物和10批有效部位進行了含量測定。實驗結(jié)果表明進樣量在0.5～2.5μg之間時線性關(guān)系良好，其回歸方程為：y=462.07x，r=0.9999，加樣回收率為99.59％，RSD為2.30％。精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性實驗結(jié)果均符合要求。藥材提取物中皂苷A的含量為4.713mg/g。有效部位中皂苷A的平均含量為0.76％，RSD為2.03