Jembrana病毒反式激活因子Tat結(jié)構(gòu)和功能的研究.pdf

1、JDV在種屬上是典型的慢病毒，然而它卻能快速發(fā)病并導(dǎo)致很高的死亡率。JDVTat不僅能激活自身LTR，還能激活BIV和HIV兩種差異明顯的LTR，且激活能力甚至強(qiáng)于BIV和HIV自身Tat，目前其多效性的具體機(jī)理尚不清楚。本文以JDVTat為材料，在借鑒其他慢病毒Tat已有成果的基礎(chǔ)上構(gòu)建了近150個(gè)質(zhì)粒，對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行了深入研究，試圖探索其反式激活機(jī)理及其在JDV快速致病中的作用。本文的工作主要包括以下5部分：通過逐步缺失和功能域

2、嵌合對(duì)JDVTat的結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了精確的劃分，為進(jìn)一步研究其激活機(jī)理奠定基礎(chǔ)；與HIV和BIVTat對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)域進(jìn)行嵌合，對(duì)比各功能域的活性強(qiáng)弱，分析RNA結(jié)合能力對(duì)反式激活的影響；通過競(jìng)爭(zhēng)抑制及反義轉(zhuǎn)譯試驗(yàn)了解JDVTat激活中可能涉及的細(xì)胞因子，利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交系統(tǒng)分析這些細(xì)胞因子在轉(zhuǎn)錄激活中的作用及其與Tat的關(guān)系；結(jié)合JDVTat自身結(jié)構(gòu)變化及其與LTR，細(xì)胞因子的關(guān)系推導(dǎo)其具有多效性的可能原因；確認(rèn)JDVTat穿越細(xì)胞質(zhì)膜的

3、能力及其對(duì)潛伏態(tài)病毒和宿主細(xì)胞基因表達(dá)的影響，推導(dǎo)其在JDV快速發(fā)病中的具體作用。 本文首次獲得了以下具有理論價(jià)值的發(fā)現(xiàn)：①精確界定了JDVTat的激活域(15-68aa)和結(jié)合域(69-80aa)，證實(shí)了各功能域的獨(dú)立性，并發(fā)現(xiàn)N端激活域的主要功能是與CyclinT1相互作用，而C端較強(qiáng)的RNA結(jié)合能力是其活性強(qiáng)于HIV和BIVTat的主要原因；②首次發(fā)現(xiàn)其N端15個(gè)氨基酸是JDVTat通過不同模式激活HIV和BIVLTR的關(guān)