端粒酶hTERT基因反義核酸對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的膀胱癌細(xì)胞（T24）凋亡的影響.pdf

1、目的端粒是真核細(xì)胞染色體末端特殊的DNA-蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，人類端粒含有TAGGG重復(fù)序列，具有重要的生物學(xué)功能。端?？煞€(wěn)定染色體，防止染色體末端融合，保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)基因。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，85％-90％以上的腫瘤細(xì)胞表達(dá)端粒酶活性。因而抑制端粒酶活性具有潛在的腫瘤防治的前景。人類端粒酶主要由三部分組成：人類端粒酶RNA成分(hTR)，人類端粒酶相關(guān)蛋白(TEP1)，人類端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶催化亞單位 (hTERT)。hTR的功能是為染色體端粒延伸起模

2、板作用，人類端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶催化亞單位 hTERT 是端粒酶活性表達(dá)的關(guān)鍵組分和限速因子。hTERT 基因mRNA在膀胱癌細(xì)胞中同時(shí)表現(xiàn)出高水平的表達(dá)，與端粒酶活性的表達(dá)一致。端粒酶RNA的反義核酸可以抑制端粒酶活性和腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)探討hTERT基因的全硫代修飾反義寡核苷酸(AS PS-ODN)對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24端粒酶活性抑制作用及hTERT基因的反義寡核苷酸對(duì)細(xì)胞因子TNF-α誘導(dǎo)膀胱癌T24細(xì)胞凋亡的影響。 方法采用T

3、RAP-銀染法及TRAP-PCR-ELISA法檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞的端粒酶活性；采用RT-PCR方法檢測(cè)hTERT基因mRNA的表達(dá)水平；以間接免疫熒光標(biāo)記法通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)hTERT基因蛋白水平的變化；采用臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)觀察hTERT AS PS-ODN與TNF-α共同作用對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24生長(zhǎng)活力的影響；倒置顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；通過流式細(xì)胞儀測(cè)定凋亡細(xì)胞的百分率。結(jié)果 hTERT 基因的全硫代修飾反義寡核苷酸(AS PS-O

4、DN)作用于膀胱癌細(xì)胞T24 48h，其端粒酶活性下降，作用72h，其端粒酶活性受到抑制，與正義寡核苷酸組，空白對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)；hTERT基因的全硫代修飾反義寡核苷酸(AS PS-ODN)作用于膀胱癌細(xì)胞T24后，hTERT基因mRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平均明顯下降，與正義寡核苷酸組，空白對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)：hTERT AS PS-ODN作用于膀胱癌細(xì)胞T24后加入TNF-α作用48小時(shí)，膀

5、胱癌細(xì)胞T24的抑制率與對(duì)照組，S PS-ODN組，ASPS-ODN組，TNF-α組及S PS-ODN+TNF-α組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)：hTERT AS PS-ODN作用于膀胱癌細(xì)胞T24后加入TNF-α作用48小時(shí)，細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)變化；hTERT AS PS-ODN作用于膀胱癌細(xì)胞T24后加入TNF-α作48小時(shí)，凋亡細(xì)胞的百分率分別同對(duì)照組，S PS-ODN組，AS PS-ODN組，TNF-α組及S PS-OD