溫?zé)峄熒险{(diào)miR-218表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞SGC7901增殖和侵襲的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分人胃癌組織中miR-218的表達(dá)及臨床意義
　　目的：
　　探討人胃癌組織中miR-218的表達(dá)變化及臨床意義。
　　方法：
　　收集經(jīng)病理證實(shí)的30例新鮮胃癌癌組織及與之配對(duì)的30例正常胃組織，用液氮罐轉(zhuǎn)運(yùn)至﹣80℃冰箱用于提取總RNA。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR（Real time RT-PCR）檢測(cè)30例胃癌癌組織和與其匹配的30例正常胃組織中miR-218表達(dá)水平，分析miR-218與胃癌臨床病理分級(jí)的相

2、關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　相對(duì)于正常胃組織，RT-PCR結(jié)果提示miR-218在腫瘤組織中的表達(dá)顯著低于在正常組織中的表達(dá)（P<0.0001）。T1/T2期miR-218平均表達(dá)量高于T3/T4期平均表達(dá)量（P=0.002）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者miR-218的平均表達(dá)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P=0.005）。Ⅲ期和Ⅳ期患者miR-218平均表達(dá)量低于I期和II期患者（P=0.018）。miR-218表達(dá)量與性別、年齡、腫瘤大小

3、、腫瘤部位、分化程度無(wú)明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　胃癌癌組織中miR-218表達(dá)明顯減少，miR-218的表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期等參數(shù)呈負(fù)相關(guān)，miR-218的表達(dá)水平對(duì)評(píng)價(jià)胃癌預(yù)后有重要參考價(jià)值。
　　第二部分溫?zé)峄熒险{(diào)miR-218表達(dá)抑制SGC7901細(xì)胞增殖和侵襲的機(jī)制
　　目的：
　　研究溫?zé)峄熒险{(diào)miR-218表達(dá)對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞增殖和侵襲的影響及可能的機(jī)制。

4、　　方法：
　　0～10μg/mL的順鉑和43℃處理人胃癌SGC7901細(xì)胞株，設(shè)一組不做任何處理的空白對(duì)照，MTS法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及IC50值，Western-blot檢測(cè)相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)。應(yīng)用Transwell小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)溫?zé)峄熀蠹?xì)胞侵襲能力的改變。RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)miR-218的預(yù)測(cè)靶基因Gli2-mRNA、E-cadherin-mRNA和蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用雙熒光素酶分析方法鑒定mi

5、R-218和Gli23'UTR的表達(dá)調(diào)節(jié)關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　溫?zé)峄熀骃GC7901細(xì)胞增殖能力減弱，凋亡增加；Transwell體外實(shí)驗(yàn)提示溫?zé)峄熀骃GC7901細(xì)胞侵襲能力減弱；溫?zé)峄熖幚鞸GC7901細(xì)胞后miR-218表達(dá)量上調(diào)，Gli2-mRNA和蛋白表達(dá)量降低，E-cadherin-mRNA和蛋白表達(dá)量上升。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)miR-218通過直接與Gli2-mRNA3'UTR結(jié)合負(fù)性調(diào)節(jié)其表達(dá)。