聚合酶鏈反應中抑制物的檢測及去除方法研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文聚合酶鏈反應中抑制物的檢測及去除方法研究姓名：李海軍申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學指導教師：趙彤20040518聚合酶鏈反應中摔制物的檢測及去除方法研究研究生李海軍導師趙彤教授中文摘要目的：惡性淋巴瘤一直是病理診斷的難點。PCR以其快速、靈敏、易于掇佟等優(yōu)點成為眾多領域的蘺選按術。避年來，PCR梭測基因重舞已經(jīng)成為漭巴瘤診斷不可缺少的手段。然兩，稷陰性一謄怒困擾PCR結果的問題之一。尤熬是由于PCR抑制物的存徑，

2、常常導致PCR出現(xiàn)假陰性結果，影響、淋巴瘢的正確診齡。墾前，關予擲案《物問題，國內尚未見系統(tǒng)研究。困詫，翔何撿出DNA援稅中摔熹l銹的存在，通過必要的方法使之去除，同時探究導致PCR假陰性的其他因素，改進固定、DNA提取以及PCR反應中的不適環(huán)節(jié)，從露提高基因黧攙的陽性率，成為本課題研究的熏點內容。方法；(1)構建一含有Bg]obin基因片段的重組質粒，作為檢測DNA撼取物中是否禽商PCR抑制物的內對照，在PCR反應中終為目的基因擴璜的

3、模板。透淑以游巴組織為主的新鮮及石蟮組織進行分組，有秘的地對新切蠟片和陳舊蠟片設立對照，常規(guī)PCR篩查陰性標本，加入內對照體系檢測抑制乍用的有無。(2)以漤巴癯綴腱系DG75綱飚DNA住為PCR反應的模扳，選擇淘定、包理、HE染甑以及消化裂解法、酚／氯仿抽掇法提取DNAj建程中所用化舉試劑10％禍爾馬林，95％Z醇，二甲苯，蘇木豢，伊紅，Tris。HCl，EDTA，苯酚，氯鑄，2％SDS，分剮取l難倍眈稀釋為l：10，l：50，1：10