銅綠假單胞菌金屬β-內(nèi)酰胺酶分布及檢測(cè)研究.pdf

1、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa PA)，又稱綠膿桿菌，是常見的醫(yī)院感染條件致病菌。近年來，隨著β-內(nèi)酰胺類抗生素、免疫抑制劑、抗腫瘤化療藥物的廣泛應(yīng)用，該菌的耐藥性越來越嚴(yán)重。銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制主要有：β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生；外膜通透性下降；外膜蛋白OprD2缺失；外膜上存在特異的藥物主動(dòng)外排系統(tǒng)等等。其中產(chǎn)生金屬β-內(nèi)酰胺酶是銅綠假單胞菌對(duì)包括亞胺培南在內(nèi)的β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要原因。 金屬β-

2、內(nèi)酰胺酶(metallo-beta-lactamase MBL)簡(jiǎn)稱金屬酶，屬于Ambler分類中的B類，具有水解各種β-內(nèi)酰胺類抗生素如青霉素類、頭孢菌素類和碳青霉烯類抗生素的作用。目前，主要的獲得性金屬β-內(nèi)酰胺酶包括IMP、VIM、SPM-1、SIM和GIM?？焖贆z測(cè)金屬酶的方法主要有：雙紙片協(xié)同試驗(yàn)、組合紙片試驗(yàn)及Etest法。 為了解我國銅綠假單胞菌金屬β-內(nèi)酰胺酶的分布及類型，選擇最為快速準(zhǔn)確、最適于臨床廣泛應(yīng)用的篩

3、選方法，本實(shí)驗(yàn)收集了全國16個(gè)城市28家醫(yī)院臨床分離的銅綠假單胞菌658株，對(duì)篩選出的353株碳青霉烯類抗生素不敏感的銅綠假單胞菌菌株采取雙紙片協(xié)同試驗(yàn)、IPM/EDTA組合紙片試驗(yàn)、Etest法(IPM／EDTA)，進(jìn)行金屬酶表型篩選，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)及克隆測(cè)序明確金屬酶基因型，并采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)對(duì)產(chǎn)金屬酶菌株進(jìn)行同源性分析。結(jié)果顯示658株銅綠假單胞菌菌株對(duì)亞胺培南的不敏感率為49.5％，對(duì)美羅培南的不敏感率

4、為46.5％，對(duì)碳青霉烯類抗生素(亞胺培南或美羅培南)的不敏感率為53.65％。PCR金屬酶基因型檢測(cè)，8株菌株金屬酶陽性，其中4株金屬酶基因型為VIM-2，另外4株為IMP-9。8株攜帶金屬酶基因的銅綠假單胞菌PFGE分型分為三個(gè)不同克隆。與基因型檢測(cè)結(jié)果比較，上述三種金屬酶表型篩選方法的敏感性除了組合紙片法(EDTA290μg及EDTA750μg以直徑之差≥7mm為標(biāo)準(zhǔn))以外，均為100％，但是特異性以Etest法和組合紙片法(ED

5、TA290μg，EDTA750μg時(shí)以直徑之差≥6mm和≥7mm及EDTA9501μg時(shí)以直徑之差≥7mm為標(biāo)準(zhǔn))最高，均為100％，雙紙片協(xié)同試驗(yàn)的特異性為91.3％-95.7％不等。 以上研究表明，來自國內(nèi)16個(gè)城市28家醫(yī)院碳青霉烯類抗生素不敏感銅綠假單胞菌的金屬酶攜帶率為2.27％，金屬酶基因型為VIM-2和IMP-9。金屬酶表型篩選方法中的組合紙片法(IPM／EDTA)，采用750μg 0.1mmol／LEDTA液滲入