紅色熒光蛋白標記的胰腺癌移植瘤轉移模型的建立及其整體熒光成像.pdf

1、目的:建立穩(wěn)定、高表達紅色熒光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的胰腺癌裸鼠移植瘤轉移模型,采用整體熒光成像系統實時監(jiān)測腫瘤的生長、轉移及微轉移的發(fā)生,從而為人胰腺癌尤其是其侵襲與轉移的惡性生物學特性的研究提供了更為理想的動物模型。 方法:以慢病毒作為載體將RFP基因轉入人胰腺癌細胞株SW1990和CFPAC-1,經梯度濃度G418篩選后96孔板有限稀釋法獲得穩(wěn)定、高表達RFP的單克隆細胞系SW199

2、0-RFP和CFPAC-1-RFP。并通過形態(tài)學觀察、細胞周期、細胞體內外生長曲線等評價轉染后細胞生物學行為的變化。采用皮下注射熒光細胞SW1990-RFP建立人胰腺癌皮下移植瘤模型、通過外科手術原位移植皮下熒光腫瘤組織小塊建立原位移植瘤自發(fā)轉移模型、采用尾靜脈注射SW1990-RFP建立實驗性肺轉移模型和脾臟注射SW1990-RFP建立實驗性肝轉移模型。應用整體熒光成像系統評價各組轉移模型腫瘤轉移及微轉移的發(fā)生。 結果:RFP

3、標記的人胰腺癌細胞SW1990-RFP和CFPAC-1-RFP在熒光顯微鏡下發(fā)出強烈均勻的紅色熒光,RFP可在體內、外持續(xù)穩(wěn)定表達而且熒光無明顯衰減。轉染前后細胞形態(tài)學、細胞周期、細胞體內外生長曲線等生物學行為無明顯改變。應用熒光細胞SW1990-RFP成功建各種胰腺癌移植瘤轉移模型,應用整體熒光成像系統可以實時監(jiān)測皮下移植瘤和原位移植瘤的生長狀況。在原位移植瘤自發(fā)轉移模型組中成功的檢測到肝臟、肺臟、網膜和腹膜轉移及微小轉移的發(fā)生。在實