地塞米松對(duì)大鼠脂肪基質(zhì)干細(xì)胞的成骨誘導(dǎo)作用.pdf

1、目的:創(chuàng)傷、腫瘤切除和畸形矯正造成的骨缺損是臨床常見(jiàn)的疾病，如何修復(fù)骨組織，重建其力學(xué)系統(tǒng)和生物學(xué)系統(tǒng)是臨床醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)之一。骨組織工程學(xué)也應(yīng)運(yùn)而生。并得到突飛猛進(jìn)的發(fā)展。隨著骨組織工程學(xué)研究的進(jìn)展，選用何種種子細(xì)胞成了研究的熱點(diǎn)之一。目前研究證實(shí)，種子細(xì)胞的來(lái)源多種多樣。包括：骨、骨膜、骨髓、骨外組織、早期胚胎等。各種來(lái)源均有其優(yōu)缺點(diǎn)。骨外組織來(lái)源的成骨潛能細(xì)胞，如脂肪細(xì)胞，因其取材容易，創(chuàng)傷小，在骨種子細(xì)胞方面有很大的潛力。本文就

2、是針對(duì)脂肪組織提取細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，并向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化初步研究。從而為骨愈合治療脂肪干細(xì)胞作為種子細(xì)胞的選擇提供一定的科學(xué)依據(jù)。 方法:本試驗(yàn)取3周齡雄性SD大鼠，頸部脫臼法處死，無(wú)菌條件下取出腹股溝脂肪墊。膠原酶-Ⅰ消化分離，接種于DMEM培養(yǎng)液中分離傳代。每日以倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況。待細(xì)胞擴(kuò)增并生長(zhǎng)穩(wěn)定后，分三組分別加不同地塞米松濃度的誘導(dǎo)培養(yǎng)液進(jìn)行成骨細(xì)胞誘導(dǎo)。每日以倒置顯微鏡觀察，約4周時(shí),用堿性磷酸酶和V

3、on Kossa染色鑒定成骨細(xì)胞分化能力。并用堿性磷酸酶試劑盒分別檢測(cè)各組細(xì)胞的堿性磷酸酶的表達(dá)量。 結(jié)果: 1.脂肪基質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)及傳代生長(zhǎng)情況原代細(xì)胞開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞短小，呈圓形或類(lèi)圓形，胞體透亮，懸浮于培養(yǎng)液中，24h后可見(jiàn)瓶底有少量細(xì)胞貼壁，48h后貼壁細(xì)胞增多，并開(kāi)始分裂增殖，以分散集落方式生長(zhǎng)。待長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶趨于融合時(shí)，細(xì)胞變得細(xì)長(zhǎng)呈紡錘形，形態(tài)與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞相似。 2.成骨細(xì)胞誘導(dǎo)和鑒定誘導(dǎo)培養(yǎng)

4、基中誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)逐漸發(fā)生變化，由紡錘形向立方形轉(zhuǎn)化。脂肪基質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)4周后進(jìn)行堿性磷酸酶染色陽(yáng)性，表明誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)由內(nèi)源性堿性磷酸酶表達(dá)。Von Kossa染色陽(yáng)性，說(shuō)明分化形成的細(xì)胞為成骨細(xì)胞。 3.堿性磷酸酶含量測(cè)定與比較將脂肪基質(zhì)干細(xì)胞分為三組誘導(dǎo)，誘導(dǎo)培養(yǎng)液中地塞米松濃度分別為10<'-9>、10<'-8>、10<'-7>mol/L。誘導(dǎo)約4周左右，分別用考馬斯亮蘭和堿性磷酸酶試劑盒測(cè)定各組樣品吸光度。根據(jù)公式

5、計(jì)算得出樣本中ALP的含量。 全部數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS12.0分析。做多樣本方差分析得：P<0.05。表明處理因素對(duì)結(jié)果有影響。進(jìn)一步做兩兩樣本多重比較。B組對(duì)A、C組P<0.05，而A、C組之間P值=0.756 P>0.05。表明B組與A、C組均數(shù)有差異。A、C組之間差異不明顯。 結(jié)論:大鼠脂肪組織中能夠分離培養(yǎng)出脂肪基質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)。后者在體外有向成骨細(xì)胞(OB)分化的潛能。地塞米松(DEX)、β-甘油磷