L-Asp誘導(dǎo)急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60凋亡.pdf

1、自從1967年Oetten等首次發(fā)現(xiàn)左旋門(mén)冬酰胺酶(L-Asparaginase, L-Asp)的抗腫瘤作用以來(lái),它已被廣泛應(yīng)用于臨床上許多腫瘤疾病的治療,并且顯著提高了患者的完全緩解率(CR)和長(zhǎng)期無(wú)病生存率(DFS)。左旋門(mén)冬酰胺酶(L-Asparaginase,L-Asp)是臨床上治療急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)的主要藥物,尤其對(duì)兒童患者療效顯著。以前研究者們普遍認(rèn)為L(zhǎng)-Asp抗腫瘤藥理機(jī)制是:L-Asp

2、能特異性催化門(mén)冬酰胺(Asn)分解成氨和門(mén)冬氨酸(Aspa)從而耗竭血漿中Asn。由于正常細(xì)胞內(nèi)部存在充足門(mén)冬酰胺合成酶(Asparaginase synthetase,AsnS)及活性,能夠催化門(mén)冬氨酸再合成門(mén)冬酰胺,從而保證了正常細(xì)胞內(nèi)的蛋白生物合成不受影響。但在腫瘤細(xì)胞中,特別是急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞和非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞,這些腫瘤細(xì)胞內(nèi)的AsnS表達(dá)量和活性都遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于正常細(xì)胞,所以不能為腫瘤細(xì)胞合成足夠的Asn,而必須依賴細(xì)胞外A

3、sn的供應(yīng),當(dāng)細(xì)胞外Asn被L-Asp耗竭后,腫瘤細(xì)胞蛋白生物合成嚴(yán)重受阻,導(dǎo)致其DNA和RNA合成嚴(yán)重受抑制,最終導(dǎo)致細(xì)胞功能受損,腫瘤細(xì)胞死亡,此為L(zhǎng)-Asp抗腫瘤公認(rèn)的原理。但是臨床治療中發(fā)現(xiàn)不同類型疾病以及相同疾病的不同患者對(duì) L-Asp敏感性和療效都不盡相同,而且這些患者血液中的Asn都已被耗竭。這提示細(xì)胞對(duì)L-Asp的敏感性存在于細(xì)胞內(nèi)部對(duì)這種氨基酸耗竭的反應(yīng)性不盡相同,從而表明不能將血漿中Asn是否已被完全耗竭作為L(zhǎng)-As

4、p是否發(fā)揮作用的標(biāo)準(zhǔn)。以往臨床上主要是將L-Asp用于治療ALL和NHL,一般不用于治療髄系白血病。但是最近國(guó)內(nèi)外研究表明用甲基硫氮二烯五環(huán)四唑分析法(MTT法)體外測(cè)定L-Asp對(duì)急性髄系白血病(AML)FAB分型(French-American-British subtype of acute myeloid leukemia)中M4,M5型細(xì)胞的毒性等同于對(duì)ALL細(xì)胞的毒性[2],并且此現(xiàn)象可用于預(yù)測(cè)臨床上用L-Asp初始化療的療

5、效反應(yīng)。其中M5型AML對(duì)臨床常規(guī)化療藥物的療效差,預(yù)后不良,死亡率高,以上研究提示L-Asp治療M5型AML具有獨(dú)有的優(yōu)勢(shì)。國(guó)外還有將L-Asp聯(lián)合其他化療藥物對(duì)AML患者進(jìn)行化療,或者聯(lián)合異基因造血干細(xì)胞移植治療AML患者,并取得良好療效的報(bào)道。這些研究結(jié)果提示L-Asp具有臨床治療AML的潛在應(yīng)用價(jià)值,其作用機(jī)制還沒(méi)有完全闡明。L-Asp誘導(dǎo)AML細(xì)胞株HL-60細(xì)胞凋亡的研究國(guó)內(nèi)尚無(wú)報(bào)到,要進(jìn)一步了解 L-Asp的治療潛能開(kāi)展本

6、課題研究是有必要的,以下為本課題研究?jī)?nèi)容。目的:為進(jìn)一步了解L-Asp臨床治療潛能和其作用機(jī)制以及開(kāi)發(fā)更有效的藥物治療AML打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:眾所周知,L-Asp治療ALL的療效是肯定的,本研究以ALL細(xì)胞株Jurkat作為陽(yáng)性對(duì)照,按照MTT法原理用細(xì)胞計(jì)數(shù) Kit-8試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8試劑盒)測(cè)量經(jīng)L-Asp處理后兩種細(xì)胞株的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況和半數(shù)抑制濃度(IC50),再做對(duì)比確定差異的統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義;用Annexin-V-FITC/PI試劑盒,羅丹明123(Rh23)檢測(cè)磷脂酰絲氨酸外翻(phosphatidylserjine,PS)和線粒體跨膜電位(Mitochondrial transmembrane potential,ΔΨm)這些細(xì)胞凋亡早期的特有變化,以及用Hoechst33258熒光染料觀察細(xì)胞凋亡形態(tài),兩細(xì)胞株間比較確定統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:L-Asp對(duì)HL-60有明顯的生長(zhǎng)抑制作用;HL-60細(xì)胞24h和48h的