遠志對DPN大鼠坐骨神經及其相關神經元胞體的保護作用.pdf

1、糖尿病周圍神經病變(diabetic peripheral neuropathy,DPN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最常見的慢性并發(fā)癥之一,其發(fā)病率高達47％～91％,是DM患者致殘甚至致死的主要因為之一。由于DPN的高發(fā)病率和高致殘率,DPN的防治已成為DM研究的重要課題。DPN的發(fā)病機制尚不十分明了,進一步探討DPN發(fā)病機制對預防和治療DPN具有十分重要的意義。
　　 近年來,中藥多靶點治療疾病受到

2、越來越多的關注。以往的研究證實,中藥遠志(Polygala)對中樞神經系統(tǒng)具有保護作用,但關于遠志對周圍神經病變作用的研究國內外報道較少。
　　 本研究采用腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DPN大鼠模型,探討遠志對DPN大鼠坐骨神經及其相關神經元胞體的保護作用,為預防和治療DPN提供實驗基礎和理論依據。
　　 第一部分遠志對DPN大鼠坐骨神經的保護作用
　　 目的:
　　 本

3、研究采用腹腔注射STZ誘導建立DPN大鼠模型,通過觀察大鼠坐骨神經形態(tài)結構和功能的變化,研究遠志對DPN大鼠坐骨神經的保護作用,進一步探討DPN的發(fā)病機制,為治療和預防DPN提供實驗基礎和理論依據。
　　 方法:
　　 雄性Wistar大鼠48只,隨機分為4組:正常對照組、DPN模型組、遠志治療組和遠志預防組,每組12只。DPN模型組、遠志治療組和遠志預防組大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,遠志預防組大鼠給予

4、遠志(2.7g生藥／kg／d)灌胃6周；DPN模型組和遠志治療組大鼠以尾部感覺神經傳導速度(sense nerve conduction velocity,SNCV)<30m／s為標準建立DPN模型。DPN模型建立后,遠志治療組大鼠給予同等劑量遠志灌胃6周。
　　 分別測定大鼠血糖(blood glucose,BG)和尾部SNCV,紫外分光光度法測定大鼠坐骨神經醛糖還原酶(aldose reductase,AR)活性,光鏡、電鏡

5、下觀察大鼠坐骨神經的形態(tài)結構,免疫組織化學方法觀察大鼠坐骨神經神經微絲蛋白(neurofilament protein,NFP)的表達。
　　 結果:
　　 1各組大鼠BG
　　 DPN模型組大鼠BG為(25.40±4.22)mmol／L,明顯高于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠志治療組和遠志預防組大鼠BG分別為(15.80±5.60)mmol／L、(17.20±4.56)mmol／L,均明顯低于DPN模型組大

6、鼠(P<0.01)。
　　 2各組大鼠尾部SNCV
　　 DPN模型組大鼠尾部SNCV為(27.45±1.16)m／s,明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠志治療組和遠志預防組大鼠尾部SNCV分別為(33.01±1.98)m／s、(33.20±1.09)m／s,均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 3各組大鼠坐骨神經的形態(tài)結構
　　 光鏡下正常對照組大鼠坐骨神經神經纖維髓鞘結構完整,軸

7、索清晰可見；DPN模型組大鼠坐骨神經神經纖維髓鞘結構模糊,軸索萎縮變性,部分神經纖維橫切面呈空泡樣；遠志治療組和遠志預防組大鼠坐骨神經神經纖維的形態(tài)結構均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 電鏡下DPN模型組大鼠坐骨神經有髓神經纖維髓鞘結構散亂、板層分離；部分神經纖維微管及微絲斷裂、溶解；軸索內線粒體嵴斷裂、腫脹變性。遠志治療組和遠志預防組坐骨神經有髓神經纖維的超微結構均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 4各組大鼠坐骨神經

8、AR活性
　　 DPN模型組大鼠坐骨神經AR活性為(1.0695±0.1811)U／mgprot,明顯高于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠志治療組和遠志預防組大鼠坐骨神經AR活性分別為(0.6266±0.1633)U／mgprot、(0.3475±0.1068)U／mgprot,均明顯低于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 5各組大鼠坐骨神經NFP的表達
　　 NFP免疫陽性產物為棕黃色細膩顆粒,位于坐骨

9、神經軸索。DPN模型組大鼠坐骨神經NFP的表達明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠志治療組和遠志預防組大鼠坐骨神經NFP的表達均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 結論:
　　 1遠志可降低:DPN大鼠BG,提高DPN大鼠尾部SNCV,改善DPN大鼠坐骨神經形態(tài)結構的病理變化,并預防DM大鼠尾部SNCV的下降,延緩DM大鼠坐骨神經形態(tài)結構的損傷。
　　 2遠志可減弱DPN大鼠坐骨神經AR活性,

10、上調DPN大鼠坐骨神經NFP的表達,并預防DM大鼠坐骨神經AR活性的增強和NFP表達的下調。
　　 3遠志對DPN大鼠坐骨神經損傷具有預防和保護作用。
　　 第二部分遠志對DPN大鼠坐骨神經相關神經元胞體的保護作用
　　 目的:
　　 本研究采用腹腔注射STZ建立DPN大鼠模型,通過觀察大鼠背根節(jié)神經元和脊髓前角運動神經元胞體形態(tài)結構和神經生長因子(nervegrowth factor,NGF)蛋白表達的

11、變化,研究遠志對DPN大鼠坐骨神經相關神經元胞體的保護作用,為預防和治療DPN提供理論依據和實驗基礎。
　　 方法:
　　 雄性Wistar大鼠48只,隨機分為4組:正常對照組、DPN模型組、遠志治療組和遠志預防組,每組12只。DPN模型組、遠志治療組和遠志預防組大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,遠志預防組大鼠給予遠志(2.7g生藥／kg／d)灌胃6周；DPN模型組和遠志治療組大鼠以尾部SNCV<30m／s為

12、標準建立DPN模型。DPN模型建立后,遠志治療組大鼠給予同等劑量遠志灌胃6周。
　　 光鏡、電鏡下觀察大鼠背根節(jié)神經元和脊髓前角運動神經元胞體的形態(tài)結構,免疫組織化學方法觀察大鼠背根節(jié)神經元和脊髓前角運動神經元NGF蛋白的表達。
　　 結果:
　　 1各組大鼠背根節(jié)神經元胞體的形態(tài)結構
　　 光鏡下正常對照組大鼠背根節(jié)神經元胞體結構完整,體積飽滿,胞核呈圓形居胞體正中,尼氏體呈顆粒狀。DPN模型組大鼠背根

13、節(jié)神經元胞體體積明顯縮小,神經元池明顯增寬,尼氏體溶解,部分神經元胞體變性,胞核溶解、消失。遠志治療組和遠志預防組大鼠背根節(jié)大部分神經元胞體的形態(tài)結構接近正常形態(tài),均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 電鏡下DPN模型組大鼠背根節(jié)神經元胞漿內線粒體高度腫脹,呈空泡樣變性,溶酶體明顯增多；粗面內質網斷裂,核糖體游離在胞漿中；核膜多處凹陷、皺褶,染色質邊集；變性嚴重的神經元胞核固縮、明顯移位且核膜溶解界限不清；胞漿內可見核碎片及大量電

14、子密度較高的致密團塊。遠志治療組和遠志預防組大鼠背根節(jié)神經元胞體的超微結構均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 2各組大鼠背根節(jié)神經元NGF蛋白的表達
　　 NGF蛋白免疫陽性產物為棕黃色細膩顆粒,位于背根節(jié)神經元胞漿和胞核,以胞漿為主。DPN模型組大鼠背根節(jié)神經元NGF蛋白的表達明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠志治療組和遠志預防組大鼠背根節(jié)神經元NGF蛋白的表達均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。

15、>　　 3各組大鼠脊髓前角運動神經元胞體的形態(tài)結構
　　 光鏡下正常對照組大鼠脊髓前角運動神經元胞體形態(tài)完整,突起清晰可見,尼氏體呈斑塊狀。DPN模型組大鼠脊髓前角運動神經元胞體體積縮小,神經元池增寬,尼氏體未見明顯變化。遠志治療組和遠志預防組大鼠脊髓前角運動神經元胞體的形態(tài)結構基本接近正常形態(tài)。
　　 電鏡下DPN模型組大鼠脊髓前角運動神經元胞體的超微結構未見明顯變化,個別神經元尼氏體溶解。遠志治療組和遠志預防組大鼠

16、脊髓前角運動神經元胞體的超微結構未見明顯變化。
　　 4各組大鼠脊髓前角運動神經元NGF蛋白的表達
　　 NGF蛋白免疫陽性產物為棕黃色細膩顆粒,位于脊髓前角運動神經元胞漿和胞核,以胞漿為主。DPN模型組大鼠脊髓前角運動神經元NGF蛋白的表達明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠志治療組和遠志預防組大鼠脊髓前角運動神經元NGF蛋白的表達均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 結論: