有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)小鼠創(chuàng)面愈合過(guò)程脾臟免疫功能及創(chuàng)面VEGF的影響.pdf

1、目的：
　　創(chuàng)傷的創(chuàng)面愈合是一個(gè)非常復(fù)雜而又十分有序的過(guò)程，當(dāng)中有許多細(xì)胞參與，在細(xì)胞增殖的同時(shí)又分泌多種因子和基質(zhì)。在免疫細(xì)胞、生長(zhǎng)因子對(duì)創(chuàng)面愈合影響方面臨床研究較多，主要是采用藥物干預(yù)，而在有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)方面，國(guó)內(nèi)外在此方面研究較少。
　　長(zhǎng)期適量的有氧運(yùn)動(dòng)能強(qiáng)身健體，提高心肺功能，這是普遍的共識(shí)。本研究試圖通過(guò)對(duì)正常小鼠以及免疫抑制模型小鼠受傷后的有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)，探討有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)對(duì)創(chuàng)面愈合時(shí)脾臟介導(dǎo)的免疫功能及VEGF表達(dá)

2、的影響，揭示有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)對(duì)創(chuàng)面愈合影響的分子及免疫機(jī)制，為有氧運(yùn)動(dòng)療法在臨床中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)參考。
　　方法：
　　本研究選擇SPF級(jí)8周齡70只健康昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，小鼠全部為雄性。小鼠按體重分層被隨機(jī)分為四組：A組（創(chuàng)傷+運(yùn)動(dòng)）、B組（創(chuàng)傷+安靜）、C組（免疫抑制+創(chuàng)傷+運(yùn)動(dòng)）、D組（免疫抑制+創(chuàng)傷+安靜）。小鼠常規(guī)飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境3天后，C、D組腹腔注射氫化可的松0.5mg/天、連續(xù)注射7天造成免疫抑制模型。A、B、C、

3、D組進(jìn)行轉(zhuǎn)輪式疲勞儀運(yùn)動(dòng)適應(yīng)3天后，參照付小兵等創(chuàng)面造模方法進(jìn)行創(chuàng)傷造模。造模后第二天開始進(jìn)行有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)。有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)參照K.Todd Keylock等的方法，采用小鼠轉(zhuǎn)籠運(yùn)動(dòng)。以15r/min，20min/次/天，持續(xù)10天實(shí)施有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)。在創(chuàng)傷后第1天、第3天、第6天、第9天對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行透明膜描記和拍照，用圖像分析軟件計(jì)算創(chuàng)面愈合速率。分別在傷后第3、6、9日運(yùn)動(dòng)后3小時(shí)末取材，傷后第3天為第一次取材，每組處死5只，傷后第6天為第

4、二次取材，每組處死6只，傷后第9天為第三次取材，每組處死6只。無(wú)菌摘取脾臟和胸腺分別稱重計(jì)算脾臟系數(shù)（SC）與胸腺系數(shù)(TC)。MTT法測(cè)定脾B淋巴細(xì)胞增殖能力(SB)和脾T淋巴細(xì)胞增殖能力(ST)。取肉芽組織采用免疫組化法測(cè)VEGF表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　注射氫化可的松7天后，C、D組小鼠出現(xiàn)萎靡不振、毛色無(wú)光澤、弓背少動(dòng)，眼睜不開，有畏寒蜷臥，反應(yīng)遲鈍，體重下降等現(xiàn)象。創(chuàng)傷造模后以上情況加劇，兩組各有一只死亡。經(jīng)過(guò)血液白

5、細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)，C、D組白細(xì)胞數(shù)量顯著低于正常組A、B組，綜上判斷小鼠氫化可的松免疫抑制模型建立成功。
　　HE染色結(jié)果，B、D組傷后第3天傷口有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，傷后第6天僅表現(xiàn)為部分組織開始修復(fù)，周邊炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；A、C組小鼠創(chuàng)面炎癥細(xì)胞較稀疏，創(chuàng)面膠原較少，傷后第9天染色觀察大部分組織開始修復(fù)。A、C組能夠盡快抑制創(chuàng)傷早期的滲出及炎性反應(yīng)、促進(jìn)肉芽組織修復(fù)性增生；而A組在在創(chuàng)傷修復(fù)中期能夠更好的促使肉芽組織修復(fù)，肉芽組織相對(duì)致

6、密、均勻。
　　四組在傷后第3天都表現(xiàn)出較高的白細(xì)胞水平。隨著運(yùn)動(dòng)天數(shù)的增加，運(yùn)動(dòng)組白細(xì)胞下降幅度顯著大于安靜組（A＞B，C＞D）。說(shuō)明傷后適量運(yùn)動(dòng)可以加速炎癥消除，從而提高機(jī)體抗損傷水平。這與Keylock研究結(jié)果一致。
　　隨著傷后有氧運(yùn)動(dòng)天數(shù)的增加，運(yùn)動(dòng)組脾臟系數(shù)與胸腺系數(shù)上升均顯著大于安靜組（A＞B，C＞D）；表明有氧運(yùn)動(dòng)提高免疫抑制小鼠機(jī)體免疫力。
　　經(jīng)過(guò)九天傷后有氧運(yùn)動(dòng)，A、C組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞對(duì)刀豆蛋

7、白A(ConA)誘導(dǎo)增殖能力與脾臟B淋巴細(xì)胞對(duì)LPS誘導(dǎo)增殖能力顯著高于B、D組顯著高于B、D組（P＜0.01）。說(shuō)明運(yùn)動(dòng)組小鼠的脾臟T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的機(jī)能活躍程度高于對(duì)照組小鼠，結(jié)果提示，有氧運(yùn)動(dòng)可能有助于增強(qiáng)脾臟T淋巴細(xì)胞與脾臟B淋巴細(xì)胞的功能。
　　免疫組化結(jié)果顯示，在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程的早期（D3）VEGF的表達(dá)A、C組呈陽(yáng)性，B、D組呈弱陽(yáng)性。在造創(chuàng)6天后（D6），A、C組VEGF的表達(dá)同時(shí)達(dá)到峰值，B、D組VEGF

8、的表達(dá)為陽(yáng)性，這與創(chuàng)傷愈合過(guò)程中新生血管形成的時(shí)間相似。創(chuàng)傷修復(fù)晚期（D9），A、C組肉芽組織增生已達(dá)頂峰，開始逐漸聚攏為團(tuán)狀，此時(shí)VEGF的表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性，而B、D組VEGF的表達(dá)與D6相比差異不大。顯示VEGF在創(chuàng)傷修復(fù)中發(fā)揮著重要作用。內(nèi)皮生長(zhǎng)因子發(fā)揮其強(qiáng)大的促細(xì)胞增殖功能，激活了運(yùn)動(dòng)過(guò)程中的毛細(xì)血管新生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，傷后適量有氧運(yùn)動(dòng)能提高小鼠免疫應(yīng)激能力和免疫功能，促進(jìn)創(chuàng)面愈合速率，這與創(chuàng)面愈合速率

9、結(jié)果相一致。
　　結(jié)論：
　　1、傷后有氧運(yùn)動(dòng)降低創(chuàng)傷小鼠白細(xì)胞水平，加速炎癥消除，提高機(jī)體抗損傷水平。
　　2、傷后有氧運(yùn)動(dòng)使免疫抑制復(fù)合皮膚創(chuàng)傷小鼠脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)均得到適量提升，脾臟T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖能力得到顯著上升，從而增強(qiáng)免疫抑制小鼠脾臟介導(dǎo)的免疫功能。
　　3、傷后有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)免疫抑制復(fù)合皮膚創(chuàng)傷小鼠創(chuàng)面VEGF的表達(dá)有明顯影響。
　　綜上，傷后有氧運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)創(chuàng)傷小鼠傷后免疫應(yīng)激能力，提升