microRNA-100對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞增殖的影響及對(duì)VEGF和survivin蛋白的調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定microRNA-100（miRNA-100）對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞系中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和survivin蛋白及mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，探討miR-100對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　方法：用人工合成的miR-100相應(yīng)的雙鏈互補(bǔ)DNA片段，插入pSilencerTM3．1-H1 neo載體表達(dá)載體，經(jīng)測(cè)序鑒定后作為micr

2、oRNA的表達(dá)質(zhì)粒；采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法用LipofeetamineTM2000(脂質(zhì)體2000)將miR-100高表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)膀胱癌T24細(xì)胞，培養(yǎng)24小時(shí)后選擇成功轉(zhuǎn)染存活率較高的細(xì)胞系繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后用RT-PCR技術(shù)和Western blot方法分別檢測(cè)該細(xì)胞系中VEGF和survivin的mRNA和蛋白表達(dá)情況，用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)膀胱癌T24細(xì)胞在24h、36h、48h和60h增殖的變化情況。再采用Anne

3、xin V/PI雙染色法進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞T24的凋亡情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法整理分析各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　1.Western blot結(jié)果顯示miR-100能夠抑制VEGF（6.20±1.13）％，P<0.05。和survivin蛋白的表達(dá)（5.60±1.02）%，P<0.05。
　　2.RT-PCR方法分析顯示VEGF(9.85±3.20)%,P<0.05.和survivin mRNA水平降低（8.

4、22±3.21）%，P<0.05。
　　3.MTT顯示轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的生長(zhǎng)速率比未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞明顯減慢,繼續(xù)培養(yǎng)60小時(shí)后抑制率（11.54±4.07）%，P<0.05。
　　4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示：轉(zhuǎn)染miR-100后的T24細(xì)胞凋亡率較空白組和對(duì)照組增加（46.35±2.14%）, P<0.05。細(xì)胞周期中G0/G1期細(xì)胞比率增高。
　　結(jié)論：
　　1.miR-100抑制T24膀胱癌細(xì)胞增殖，提示可能是miR-10