γ-Tubulin dsRNA載體的構建及其在煙草細胞中的功能研究.pdf

1、隨著人類基因組測序工作的完成，基因組研究已經由以全基因組測序為目標的結構基因組學轉向以基因功能鑒定為目標的功能基因組學研究。近幾年發(fā)展起來的RNAi技術，能快速有效的關閉相應基因，使生物體產生相應的功能缺陷表型，從而確定未知基因的功能。以其特異性、高效性和廣泛性的優(yōu)勢，已經逐漸成為一項極具潛力的基因功能研究技術。RNA干擾技術的發(fā)現已經為我們深入了解基因功能、疾病發(fā)生以及植物—病毒互作關系提供了一個簡捷高效的特異性手段。目前利用RNA干

2、擾技術進行植物體發(fā)育過程中基因功能的研究，植物體內致病基因、程序性死亡有關基因的研究，動物的工程化抗病毒研究等還很少，這也為RNA干擾技術更廣泛的應用提供了廣闊的空間。 γ-微管蛋白(γ-TUBULIN)是動物細胞微管組織中心的重要組成成分，它廣泛存在于真核生物細胞中。已有的研究證明，它在微管成核的起始、裝配和取向等方面具有重要作用，也與有絲分裂紡錘體的形成及細胞周期調控相關。本研究通過轉基因技術在煙草(N.tabacumvar

3、.SamsunNN)的基因組中同時引γ-tubulin部分cDNA的反義和正義片段得到了低水平表達γ-tubulin的煙草植株，發(fā)現降低該基因的表達對于植物的發(fā)育有明顯的影響。與對照相比，低表達γ-tubulin的無菌苗植株表現出植株生長非常緩慢，葉片顏色黃綠，有的植株甚至繼代多次該表型基本穩(wěn)定；根的發(fā)生非常困難，偶有發(fā)生也與普通的轉基因植株有明顯區(qū)別，表現為根毛不發(fā)達、根較粗，皮層內側細胞較大，輸導組織不發(fā)達，對養(yǎng)分的吸收困難。因此我