Foxp3基因在胃癌的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的:翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3(Foxp3) 高表達(dá)于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)并在介導(dǎo)抑制功能方面發(fā)揮著重要作用。最近，F(xiàn)oxp3 不斷被證實(shí)表達(dá)于多種類型的腫瘤細(xì)胞，但是胃癌還未見報(bào)道。通過本研究擬探討：胃癌中是否存在Foxp3轉(zhuǎn)錄物和成熟蛋白的表達(dá)；在共培養(yǎng)體系中，效應(yīng)T細(xì)胞增殖的阻滯是否與Foxp3的表達(dá)有關(guān)。從而進(jìn)一步揭示腫瘤細(xì)胞參與免疫逃逸的機(jī)制及發(fā)掘Foxp3 潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法:根據(jù)Treg細(xì)

2、胞表達(dá)Foxp3的特點(diǎn)，以此為陽性對(duì)照，建立PCR、流式細(xì)胞術(shù)、Western blot和免疫組化等Foxp3的檢測(cè)方法并進(jìn)一步分析其在胃癌的表達(dá)水平和分布特點(diǎn)。利用CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25-CD127+作為表面標(biāo)志，分選Treg細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞，評(píng)價(jià)胃癌細(xì)胞對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞增殖的抑制能力。通過使用transwell 裝置分隔共培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞/Treg細(xì)胞和T細(xì)胞，進(jìn)一步探討增殖阻滯是否依賴細(xì)胞間接觸的方式。

3、 結(jié)果: ①胃癌中Foxp3基因的表達(dá)：通過PCR、流式細(xì)胞術(shù)、Western blot等檢測(cè)方法，檢測(cè)到Foxp3mRNA和蛋白在各類型細(xì)胞的表達(dá)水平呈現(xiàn)一定的模式：PBMC(Treg)>BGC>SGC>MGC>GES-1(正常對(duì)照)，其中胃癌細(xì)胞Foxp3 表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照GES-1，但低于PBMC(Treg)的Foxp3 表達(dá)水平。Foxp3 免疫組化也證實(shí)了胃癌微環(huán)境中浸潤(rùn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Foxp3+胃癌細(xì)

4、胞的存在，正常胃組織未見陽性染色。 ②胃癌細(xì)胞抑制效應(yīng)T細(xì)胞的增殖：在運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)成功分選Treg細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞的基礎(chǔ)上，體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)Treg細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞的比例為1:1時(shí)，Treg細(xì)胞能明顯抑制效應(yīng)T細(xì)胞增殖；而且，F(xiàn)oxp3+胃癌細(xì)胞也具有免疫抑制活性，雖然相比Treg細(xì)胞其活性較弱，但明顯高于正常對(duì)照GES-1。此外，相比transwell組將兩類共培養(yǎng)細(xì)胞分隔開，直接接觸組Foxp3+細(xì)胞對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞的增