腫瘤壞死因子-α及白細胞介素-1β對肝癌細胞乙酰肝素酶表達的影響.pdf

1、目的：肝細胞癌(HCC)是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，且近年來其發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢。由于其具有侵襲性強，易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性，目前包括手術(shù)、放療、化療等各種治療方法的效果均不夠理想。因此，明確其侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生機制和探索新的、有效的治療方法已成為當前腫瘤學(xué)研究的熱點課題。乙酰肝素酶(hpa)是目前發(fā)現(xiàn)的哺乳動物細胞中唯一能切割細胞外基質(zhì)中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖側(cè)鏈的內(nèi)源性糖苷酶，在腫瘤組織中廣泛表達，通過降解細胞外基質(zhì)

2、和血管基底膜、釋放和活化線形硫酸乙酰肝素側(cè)鏈結(jié)合型的生長因子(如 bFGF、VEGF等)誘導(dǎo)血管生成，對促進腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移起重要作用。TNF-α、IL-1β是由多種免疫細胞產(chǎn)生和分泌的較為重要且具有代表性的細胞因子，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等多種生物學(xué)功能。有研究報道炎癥發(fā)生時，機體分泌的TNF-α、IL-1β能夠刺激內(nèi)皮細胞 Hpa 表達上調(diào)，從而有利于炎細胞的擴散。此效應(yīng)在腫瘤發(fā)生時是否同樣顯現(xiàn)則未見報道。本研究通過應(yīng)用TNF-α、

3、IL-1β分別處理SMMC-7721肝癌細胞，觀察HpamRNA和蛋白表達的變化，明確TNF-α及IL-1β與Hpa表達之間的關(guān)系，為進一步探討肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移的機制以及以Hpa為新靶點的治療方法提供試驗依據(jù)。 方法：肝癌細胞系 SMMC-7721 分對照組和試驗組。對照組細胞常規(guī)培養(yǎng)，試驗組細胞分別施加TNF-α、IL-1β干預(yù)，設(shè)濃度梯度和時間梯度。采用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)，測定細胞Hpa mRNA表達

4、的變化，以β-actin作為內(nèi)參照標準，通過凝膠掃描儀對擴增產(chǎn)物進行DNA電泳條帶的光密度值分析，將 Hpa 與β-actin比值作為 HpamRNA表達水平的參數(shù)，對Hpa產(chǎn)物相對定量；以 Westernblot方法檢測SMMC-7721細胞胞漿 Hpa 蛋白表達的變化，同樣以β-actin作為內(nèi)參照標準，對 Hpa 蛋白進行相對定量分析。所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件進行單因素方差分析(ANOVA)和t檢驗

5、。P<0.05為有顯著差異。 結(jié)果： 1.不同濃度的TNF-α、IL-1β作用不同時間后，SMMC-7721細胞Hpa mRNA表達較對照組逐漸增高，且在TNf-α濃度為10<'4>U/L-10<'6>U/L、IL-1β濃度為0.5μg/L-5.0μg/L范圍內(nèi)存在濃度依賴性，不存在時間依賴性。 2.不同濃度的 TNF-α、IL-1β作用不同時間對SMMC-7721細胞胞漿Hpa蛋白表達亦有促進作用，其隨藥物