以BMP-2為靶位促成骨細胞分化及以Cathepsin K為靶位抑制破骨細胞降解作用的兩個新型抗骨質疏松藥物篩選模型的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分本課題從人體內膽固醇代謝機制和細胞信號傳導通路的作用機制出發(fā),將快捷靈敏的微生物測試法和基于細胞水平上的準確性較高的促BMP-2表達上調檢測方法相結合,建立了篩選新模型,克服了單一細胞模型不宜篩選來源廣泛、成分復雜的天然產(chǎn)物庫的局限性,更加適合現(xiàn)代高通量藥物篩選的需要.篩選得到的鄰巰乙基苯甲醛衍生物為首次被發(fā)現(xiàn)具有BMP-2表達上調的作用的化合物,為抗骨質疏松藥物的研發(fā)開辟了新思路,其藥理和毒理活性值得進一步闡明.第二部分我們建

2、立了一個有效評估組織蛋白酶K抑制劑的檢測方法來篩選抗骨質疏松藥物.為了得到純化的組織蛋白酶K,首先通過mRNA逆轉錄從人骨瘤細胞MG63中得到987kb的組織蛋白酶K cDNA全長序列并測序驗證.組織蛋白酶K在IPTG誘導下在E.coli細胞中大量表達,經(jīng)過復性和純化后得到單一條帶.Western雜交顯示了蛋白的特異性.初篩以抑制木瓜蛋白酶的活性為指標,經(jīng)篩選從1000株真菌中得到9株具有較強抑制效應的真菌,復篩采用對純化的組織蛋白酶K

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