毛白楊癭木形成的解剖學特征初步研究與毛白楊體內農桿菌的檢測.pdf

1、癭木因其多變的色彩，美麗大方的紋理被廣泛的應用于珍貴家具的貼面和各種各樣的工藝品的制作上。但由于癭木自身形成的特殊過程，使癭木生產受到限制。本課題研究的目的是利用微生物的致病性進行癭木的培育，以獲得更多的癭木原材料。本文以毛白楊雄株-D組織培養(yǎng)苗為實驗材料，利用根癌農桿菌侵染植物的特性，對毛白楊雄株-D進行了野生根癌農桿菌致瘤基因的轉化，建立了轉致瘤基因的毛白楊的再生體系；對被致瘤根癌農桿菌侵染的毛白楊雄株-D的莖及發(fā)生的癭瘤，進行細胞

2、組織學觀察；最后對致瘤根癌農桿菌接種毛白楊雄株-D后，其在植物體內的分布進行了檢測。 本試驗主要得出以下結論：1.毛白楊雄株-D被根癌農桿菌侵染后，取第5d和第30d腫瘤及其附近的莖組織，進行解剖結構觀察發(fā)現(xiàn)：當致瘤農桿菌侵染毛白楊莖組織時，形成層細胞和木質部薄壁細胞對農桿菌最為敏感，接種位置的形成層向外分裂的細胞數(shù)量明顯增多，同時木質部的薄壁細胞以及髓心部位也產生大量細胞，并逐漸分化成木質部細胞，這說明該部位可能是腫瘤細胞形成

3、過程中，細胞發(fā)生分裂的起始部位。由于冠癭細胞的大量增生，對莖的組織結構也產生了一定的影響，寄主的莖橫切面呈不規(guī)則圓形，增生部位的髓射線明顯增多，而正常植株只有少數(shù)幾列或者不明顯。維管束中，導管數(shù)量減少，接種部位下寄主維管束增生后，導管口徑增大，而接種部位以上寄主維管束中導管口徑變小。在瘤體組織中可明顯觀察到維管束的分化，通常木質部成分被韌皮部成分包被，木質部元素呈樹狀分支或渦旋狀分布，并和寄主維管束相連接。 2.用根癌農桿菌(A

4、grobacteriumtumfacience)三個菌株感染轉雙抗蟲基因毛白楊雄株-D無菌苗，誘導冠癭瘤，結果表明1-1-2菌株的的毒性(致瘤能力)最強，毛白楊雄株-D冠癭組織經除菌后能在無激素的培養(yǎng)基上良好生長，MS培養(yǎng)基附加TDZ0.1mg/L+IBA1.0mg/L誘導毛白楊再生植株的頻率最高。對誘導分化的再生植株進行高壓紙電泳和PCR檢測，有三個系號檢測到冠癭堿，同時也檢測到外源基因(iaaH,tml,chvD)的特異擴增條帶，這

5、表明Ti質粒轉化毛白楊雄株-D成功。 3.致瘤根癌農桿菌1-1-2針刺接種組培苗后，在一個月以后進一步分離植物各個器官中的細菌，并采用PCR技術檢測目的菌在植物中的分布，在組培苗植株的根，莖，葉，瘤中均分離并檢測到了目的菌株的存在，推測毛白楊組培苗莖部被接種以后，根癌農桿菌可能在毛白楊樹體內隨樹液流動而分布到其它各個器官。根癌農桿菌人工接種大田毛白楊雄株后，對樹體各個器官進行細菌的分離，結果只在冠癭瘤中分離并檢測到目的菌，在植物