基質(zhì)金屬蛋白酶-2的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)是由HuhtalaP.等人在1990年克隆表達(dá)的，其結(jié)構(gòu)中含有信號(hào)肽、前肽、催化區(qū)、纖維連接蛋白樣區(qū)域及血紅素結(jié)合樣區(qū)域。人類MMP-2基因編碼分子量約72kd的酶原，經(jīng)活化后水解為65kd的活性形式。MMP-2是降解細(xì)胞外基質(zhì)骨架蛋白Ⅳ型膠原主要酶之一。研究發(fā)現(xiàn)MMP-2與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移、自身性疾病自身免疫性疾病、牙周疾病以及腫瘤組織的血管生成密切相關(guān)。鑒于MMP-2的重要病理生理功能，本研究旨在基礎(chǔ)

2、和臨床兩方面對(duì)MMP-2的功能作進(jìn)一步探討。通過在體外表達(dá)MMP-2所特有的結(jié)構(gòu)域，我們制備出抗MMP-2的特異性單克隆抗體，利用所制備的單克隆抗體初步建立了檢測血清/漿MMP-2水平的試劑盒，并且對(duì)正常人及良惡性腫瘤病人血清MMP-2水平進(jìn)行了測定和比較，這為檢測MMP-2提供了一個(gè)有效的工具；運(yùn)用RNA干擾(RNAi)技術(shù)對(duì)MMP-2基因進(jìn)行基因沉默，更進(jìn)一步揭示了MMP-2的功能及可能的作用機(jī)制；同時(shí)對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶在慢性粒細(xì)胞性

3、白血病，這一特殊類型的腫瘤中的作用進(jìn)行了初步探討。1.MMP-2單克隆抗體制備及功能研究　　根據(jù)GenBank中MMP-2cDNA序列設(shè)計(jì)引物，體外培養(yǎng)EAhy926內(nèi)皮細(xì)胞，收集細(xì)胞后抽提總RNA，利用所合成引物經(jīng)RT-PCR獲得纖維連接蛋白樣片段cDNA，與pET20b(+)表達(dá)載體重組后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)plus，挑選陽性克隆后，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)蛋白。蛋白經(jīng)次氮基三乙酸鎳瓊脂糖(Ni-NTAagarose)柱純化濃